人高转移肺癌细胞（95-D）

人高转移肺癌细胞（95-D)
细胞介绍
这是一株高转移肺癌细胞。
 
细胞特性
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻【dòng】存管包【bāo】装【zhuāng】运输【shū】和保存：可选择干冰【bīng】运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即【jí】转【zhuǎn】入液【yè】氮【dàn】冻存或直接复苏【sū】；（2)存活细胞，收到后【hòu】应继续生长，传代达到细胞生【shēng】长状态【tài】良好时，再进【jìn】。具体操作见细【xì】胞【bāo】培养步骤。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC03 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2. 培【péi】养条件：气相【xiàng】：空【kōng】气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培【péi】养基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二天【tiān】换液【yè】并检查细【xì】胞密度。细胞传代：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分【fèn】钟，然后在显微镜【jìng】下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿作台【tái】，轻【qīng】敲【qiāo】几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基【jī】终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培【péi】养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法【fǎ】一：收集细胞【bāo】，1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀，将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
方法【fǎ】二：可选择半数换液方【fāng】式，弃【qì】去半数培养基后，将剩【shèng】余细胞悬起，将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的【de】含8ml培养基的新皿中【zhōng】或【huò】者瓶中。细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，可进行【háng】细胞冻存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基【jī】后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入【rù】约lml含【hán】血清的培养基后加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。悬【xuán】浮细胞冻存时，应【yīng】将细【xì】胞【bāo】收集，1000RPM条件下离心4分钟，少【shǎo】量保存上清液（防【fáng】止细【xì】胞吸走)，加入部分新【xīn】鲜培养【yǎng】基【jī】，加入到【dào】冻存管中，在冻【dòng】存管中【zhōng】加【jiā】入1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操作，并请注【zhù】意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭【miè】菌【jun1】后【hòu】方能丢【diū】弃。