人胃癌前细胞（GES-1）

人胃癌前细胞(GES-1)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-H 培养基(DMEM-H:GIBCO, 添加 NaHC031.5g八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。PS:1%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度为【wéi】70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬【xuán】液加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天【tiān】换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌前细胞(GES-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加【jiā】少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基【jī】，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶【píng】中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存【cún】。贴【tiē】壁细【xì】胞冻存时，弃去培养【yǎng】基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血清的培养【yǎng】基【jī】后【hòu】加入冻【dòng】存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行【háng】冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污【wū】染【rǎn】，请立即与我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二级生【shēng】物【wù】安全台内【nèi】操【cāo】作，并请注意【yì】防护，所有废【fèi】液【yè】及接【jiē】触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：胃
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌前细胞(GES-1)运输和保存：使【shǐ】用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到细胞后， 可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上【shàng】清，加入【rù】推荐 使【shǐ】用【yòng】的【de】培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养【yǎng】瓶【píng】中【zhōng】培养，传代【dài】达到细胞生长【zhǎng】 状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操作见细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。