人正常前列腺基质永生化细胞 （WPMY-1）

人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)
细胞介绍：
通【tōng】过一个pRSTV质料【liào】结构，用SV40大T抗原对基质细胞进行永生【shēng】化。肌成纤维【wéi】基质细【xì】胞株，WPMY-1与【yǔ】RWPE-1细胞一【yī】样【yàng】，来源于同一张成人【rén】前列腺组织切片的周围区域【yù】的基质细胞。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，95%;胎牛【niú】血清【qīng】，5%。
2.培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱【xiāng】湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2.细胞处理：
1)复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管迅速放【fàng】入37°C水浴中（水面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入【rù】事先准备好的【de】含有4mL培养基的15ml离【lí】心【xīn】管中混【hún】合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，加入lmL培 养基【jī】后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬【xuán】液移入【rù】含有5ml培养基的培养【yǎng】瓶中培养过夜。第二天换【huàn】液并检查细胞密度【dù】。
2)细【xì】胞传【chuán】代：如果细胞密度达80%-90%，即可进【jìn】行传代培养。
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观【guān】察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后加入3ml此细胞的 培养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打【dǎ】后吸出，移入15ml离心【xīn】管中，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培养液后吹【chuī】匀【yún】。移入到事【shì】先准备好的【de】含有5ml培养【yǎng】基【jī】的T-25培养瓶中或含【hán】有14ml培养 基的T-75培【péi】养瓶中培【péi】养。
 
细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，先要【yào】消化处理并【bìng】进行细胞计数。消【xiāo】化方【fāng】法【fǎ】按照细胞【bāo】传代方法的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直【zhí】接计【jì】数后离【lí】心，用血【xuè】清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅速混匀【yún】，按每lml的数量分配到冻存【cún】管中。本公司按每个【gè】冻存【cún】管细胞数目【mù】大于1X106个细胞冻存【cún】。
 
注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后【hòu】，若发现干冰【bīng】己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为【wéi】有潜在【zài】的【de】生物危害【hài】性，必须在二级生物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注【zhù】意防护【hù】，所【suǒ】有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺
2)形态：成肌细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确认细胞生【shēng】长状【zhuàng】态，去【qù】掉封口膜并将T25瓶【píng】置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及时【shí】进行细【xì】胞传代，传代【dài】培养用6ml本公司【sī】附 带的【de】*培养基【jī】。
5.接到【dào】细胞次日，请检【jiǎn】查细【xì】胞是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或疑似【sì】污染，请及时【shí】与我【wǒ】 们取得电联。
细胞用途：仅供使用。