人髓样甲状腺肿瘤细胞 （TT）

人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)
细胞介绍：
TT细胞【bāo】由LeongSS等，自一位77岁白人女性【xìng】甲状腺髓样癌患【huàn】者的穿刺活检样本中建【jiàn】立【lì】。TT细胞持续【xù】产生高水平的降血钙素和【hé】CEA。更换培养基后24h和72h，在培【péi】养基【jī】中检测到的【de】免疫【yì】活【huó】性的【de】降血钙素浓度分别为3900 pg/106个细胞【bāo】和7700 pg/106个细胞。72小时后CEA积累浓度超过27 ng/106个细胞。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】F12K培【péi】养基(F12K，GIBC0)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水【shuǐ】浴中（水面【miàn】要低于【yú】冻存【cún】管盖部）摇晃【huǎng】解冻，移入【rù】事先准备好的含有【yǒu】4mL培养【yǎng】基的15ml离心【xīn】 管中混合均【jun1】匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培养基后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液移入含有【yǒu】5ml培【péi】养基的【de】培养瓶中培养过【guò】夜。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操作台【tái】，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶后加入3ml此【cǐ】细胞的培养【yǎng】基终【zhōng】止消化。轻轻吹【chuī】打后【hòu】吸出，移入15ml离心管中【zhōng】，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液【yè】后吹【chuī】匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的【de】T-25培养瓶中或【huò】含有14ml培【péi】养基的T-75培【péi】养瓶中【zhōng】培养。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞【bāo】冻存时，先要消化处【chù】理并【bìng】进行细胞计数。消化【huà】方【fāng】法按照细胞传【chuán】代方法的9-21步【bù】骤进行，后的重悬液使用【yòng】血清。悬浮细胞直接【jiē】计数后离心，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速【sù】混【hún】匀，按【àn】每【měi】lml的数量分配到冻存【cún】管中【zhōng】。本公司按每个冻存管【guǎn】细【xì】胞数目大【dà】于1X106个【gè】细胞冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必【bì】须【xū】在二级【jí】生【shēng】物安全【quán】台内操作，并请注【zhù】意防护【hù】，所有【yǒu】废【fèi】液及接触过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。
细胞特性：
1)来源：甲状腺
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下确认细胞生【shēng】长【zhǎng】状态，去【qù】掉【diào】封口膜并将T25瓶置【zhì】于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长【zhǎng】满【mǎn】（90%以【yǐ】上）请及时进行细【xì】胞传代，传【chuán】代培养【yǎng】用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞【bāo】是【shì】否污染，若【ruò】发现污【wū】染或疑似污染【rǎn】，请及时与我们取得【dé】电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。