人头颈鱗癌细胞 （Tu212）

人头颈鱗癌细胞 (Tu212)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM/F12 培养基【jī】(DMEM/F12:GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻【dòng】存【cún】管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后【hòu】将所【suǒ】有【yǒu】细胞悬液加【jiā】入【rù】培养瓶中培【péi】养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换液【yè】并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人头颈鱗癌细胞 (Tu212)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用【yòng】不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细胞【bāo】9-21次。力【lì】口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微【wēi】镜下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部分【fèn】变圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶后加【jiā】少【shǎo】量培养【yǎng】基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新【xīn】皿中或【huò】者【zhě】瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长【zhǎng】状态良【liáng】好时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养【yǎng】基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含血清【qīng】的培养基【jī】后 加入冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污【wū】染【rǎn】，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均视【shì】为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在【zài】二级生物安【ān】全台内操作【zuò】，并请注意【yì】防护，所有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：头颈鳞癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人头颈鱗癌细胞 (Tu212)运【yùn】输和保存：使用含有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活【huó】细胞。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加入推荐【jiàn】使用的培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿【mǐn】或者T75培养瓶中培养，传代达【dá】到【dào】细胞生长状态【tài】良好时，再进行【háng】冻【dòng】存。具体操【cāo】作见【jiàn】细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。