人喉癌细胞 （TU 686）

人喉癌细胞 (TU 686)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37°C，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻【dòng】存管盖部）摇晃解冻，移入事先准【zhǔn】备好的含有4mL培养基的15ml离心管中【zhōng】混合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分钟，弃去【qù】上清液，加【jiā】入lmL培 养基后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬【xuán】液移入【rù】含有【yǒu】5ml培养基【jī】的【de】培养【yǎng】瓶中培养过夜。 第二天【tiān】换【huàn】液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人喉癌细胞 (TU 686)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培养【yǎng】上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细【xì】胞消化情况【kuàng】，若细胞【bāo】大【dà】部分变【biàn】圆【yuán】并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加入【rù】3ml此细胞的培养基终止【zhǐ】消化。轻轻【qīng】吹打后吸出，移入15ml离心管【guǎn】中，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟， 弃去【qù】上清液，加【jiā】入lmL培养液后吹匀。移【yí】入到事先准备好【hǎo】的含有5ml培养基的T-25培养瓶【píng】中或含有14ml培养基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存【cún】时，先要消化处理并进行【háng】细胞计数。消化方【fāng】法按照细【xì】胞传【chuán】代方法的9-21步骤进行，后【hòu】的重【chóng】悬液【yè】使【shǐ】用血清【qīng】。悬浮细胞【bāo】直接计数【shù】后【hòu】离【lí】心，用血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每【měi】个冻【dòng】存管【guǎn】细胞数【shù】目大于1X106个【gè】细胞冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生【shēng】物【wù】危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：喉部
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人喉癌细胞 (TU 686)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确【què】认细胞生长状【zhuàng】态，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶【píng】置于37°C培【péi】养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满【mǎn】（90%以上）请及时进行细胞传代，传【chuán】代培养用【yòng】6ml本公司附带的*培【péi】养基。
5.接到【dào】细胞次日，请检查细胞是否污【wū】染，若发现污染【rǎn】或疑似污染，请及时【shí】与我【wǒ】们取得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。