猪肺泡巨噬细胞（3D4-21）

猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)
细胞介绍
母细胞3D4来源于【yú】pSV3neo质粒转染猪原代肺【fèi】泡巨【jù】噬细胞【bāo】得到的【de】。该克隆通【tōng】过G418筛选得到。
 
细胞特性
1)来源：猪肺
2)形态：巨噬细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜【jìng】下确认细【xì】胞生长状态，去【qù】掉封口【kǒu】膜【mó】并将【jiāng】T25瓶置于【yú】37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及【jí】时进行【háng】细胞【bāo】传代【dài】，传代培养【yǎng】用6ml本公司附带的*培【péi】养基【jī】。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或【huò】疑似污【wū】染，请及【jí】时与我们取得电联。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】（RPMI-1640，GIBCO)，90%;添加0_lmM NEAA, ImM丙酮酸钠【nà】；胎牛血【xuè】清，10%。
2.培【péi】养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管迅【xùn】速放入37°C水浴中【zhōng】（水【shuǐ】面要【yào】低于冻【dòng】存管盖部【bù】）摇晃解冻，移入事【shì】先【xiān】准备【bèi】好的含有4mL培【péi】养【yǎng】基的15ml离【lí】心管中混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入【rù】lmL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液移入含有【yǒu】5ml培养【yǎng】基的【de】培养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜【yè】。第【dì】二天换液并检查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不【bú】含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察【chá】细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速【sù】拿操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后【hòu】加入3ml此细胞的【de】培养基终【zhōng】止消化。轻轻吹打后吸出，移入【rù】15ml离心管中，在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去【qù】上清液，加入【rù】lmL培养液后【hòu】吹【chuī】匀。移入【rù】到事【shì】先准备好的含有5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时【shí】，先要消化【huà】处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞【bāo】传代方法的9-21步骤进行，后的重悬【xuán】液使用血清。悬浮【fú】细【xì】胞直接【jiē】计数【shù】后【hòu】离心，用血【xuè】清重悬浮【fú】，加DMSO至终【zhōng】浓度【dù】为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到【dào】冻存管中【zhōng】。本【běn】公司按每【měi】个冻存管细胞【bāo】数目【mù】大于1X106个细胞冻存。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请【qǐng】立即与我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生【shēng】物危害【hài】性，必须在二级生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后方能【néng】丢弃。