肾胚瘤细胞（G-401）

肾胚瘤细胞(G-401)
细胞介绍：
G-401细胞【bāo】来源于韦【wéi】尔姆斯【sī】氏瘤【liú】，该细胞表达成肾细胞生长因子【zǐ】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCOY's 5A 培【péi】养基(McCOY's 5A，SIGMA,添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培【péi】养条件【jiàn】：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的【de】冻【dòng】存【cún】管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解【jiě】冻，加 入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约【yuē】8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二【èr】天换液【yè】并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
肾胚瘤细胞(G-401)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消【xiāo】化【huà】9-21分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞大部【bù】 分变【biàn】圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培【péi】养瓶【píng】后加少量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液【yè】后吹匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的【de】含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者【zhě】瓶中【zhōng】。
 
细【xì】胞冻【dòng】存：待【dài】细【xì】胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱【tuō】落后，加【jiā】入【rù】约lml含血清的培养基后【hòu】加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后【hòu】，若发现干冰己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性【xìng】，必须【xū】在【zài】二级生【shēng】物安【ān】全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液及接触过【guò】此细胞【bāo】的【de】器皿需要灭【miè】菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：肾脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
肾胚瘤细胞(G-401)运输和【hé】保存：使【shǐ】用T25瓶【píng】充液发送活细【xì】胞。收到【dào】细胞后，请先在显微镜下检查细 胞生【shēng】长【zhǎng】状态，并将T25瓶置【zhì】于培养箱约6h或过夜后【hòu】，再次检查细胞状态。若【ruò】状态良好，可按照以下【xià】细胞培【péi】养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物【wù】，请及时【shí】与我们取得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。