人永生化表皮细胞（HaCat）

人永生化表皮细胞(HaCat)
细胞介绍
该细胞【bāo】源自一位 62 岁患有黑色素瘤男性【xìng】的【de】病灶【zào】外【wài】围正常【cháng】皮肤，角蛋白【bái】、角化细胞交联【lián】外膜【mó】蛋白、中间丝相关蛋白阳性。
 
细胞特性
1.  来源：正常表皮细胞
2.  形态 ：上皮细胞样，贴壁生长
3.  含量：>1x10 6 个/mL
4.  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5.  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和【hé】保存：使用【yòng】含【hán】有胎牛血【xuè】清的 2ml 冻存【cún】管发送存活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后【hòu】，可在【zài】 1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心 5min 后，于洁【jié】净操作台弃去上【shàng】清，加【jiā】入推荐【jiàn】使用的培养基【jī】后【hòu】转移至10cm 培养【yǎng】皿或者 T25 培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养【yǎng】步骤。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准【zhǔn】备 DMEM 培养基【jī】(DMEM，GIBCO)，85%；北美胎牛血【xuè】清(United States，GIBCO)，15%。

2）培养【yǎng】条【tiáo】件【jiàn】： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏【shì】度，培养箱【xiāng】湿度为 70%-80%。
3）冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO，现用【yòng】现配。液氮储【chǔ】存。
 
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细胞：将含【hán】有 1mL 细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在【zài】 37℃水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培【péi】养基混合均匀。在 1000RPM 条件【jiàn】下离心 4 分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀【yún】。然【rán】后将所有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将细【xì】胞【bāo】悬液加入 10cm 皿中，加【jiā】入约 8ml 培养基【jī】，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检【jiǎn】查细胞【bāo】密【mì】度。
2） 细胞传代【dài】：如果细胞密度达 80%-90%，即【jí】可进行传代【dài】培养。对于贴壁细【xì】胞，传【chuán】代可参考以下方【fāng】法：
1. 弃去培养上清【qīng】，用不含钙、镁【měi】离【lí】子的 PBS 润洗细【xì】胞 9-21 次。
2. 加 2ml 消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培【péi】养瓶【píng】中，置于 37℃培养箱中消化 9-21 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细【xì】胞大【dà】部分变圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化【huà】。
3. 按 6-8ml/瓶补加【jiā】培【péi】养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在 1000RPM 条件下【xià】离心【xīn】 4 分【fèn】钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将【jiāng】细胞悬液按 1：2 到【dào】 1：5 的【de】比例分到新的【de】含 8ml 培养【yǎng】基的新【xīn】皿中或者【zhě】瓶中。
3）细胞冻存【cún】：待细【xì】胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培养基【jī】后加入少量胰酶，细【xì】胞【bāo】变圆脱落【luò】后【hòu】，加入约 1ml 含血清的培【péi】养基后加入冻存管【guǎn】中，再【zài】添加 10%DMSO 后【hòu】进行冻存。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)注意事项：
1. 收到【dào】细【xì】胞后，若发现干冰已挥发干净、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立【lì】即与我们电联。
2. 所有动物细【xì】胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性【xìng】，必【bì】须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触【chù】过【guò】此细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。