人膀胱癌细胞 （EJ）

人膀胱癌细胞 (EJ)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPMI-1640培养基，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻【dòng】，加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液【yè】加入培养瓶中培【péi】养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天【tiān】换液并检查细【xì】胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱癌细胞 (EJ)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-21次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微镜【jìng】下观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后吸出【chū】，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基的【de】新皿中或者瓶【píng】中。
 
3)细【xì】胞冻存：待细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入【rù】少量胰酶，细【xì】胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的培养【yǎng】基后加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存【cún】。

注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖脱【tuō】落【luò】、破损及细胞有污【wū】染，请立【lì】即与【yǔ】我们电联。
所【suǒ】有动【dòng】物【wù】细【xì】胞均视为【wéi】有潜【qián】在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意【yì】防护，所有废液及接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱癌细胞 (EJ)运【yùn】输和保存：使【shǐ】用含有【yǒu】胎牛血清【qīng】的【de】2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使【shǐ】用的【de】培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培【péi】养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。