人食管癌细胞（Eca-109）

人食管癌细胞(Eca-109)
细胞介绍：
1973年【nián】建系，来自人食管中段鳞癌【ái】组织【zhī】，小块法【fǎ】原代培养建系。BALB/c裸【luǒ】鼠移植成瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPMI-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细【xì】胞【bāo】悬液【yè】加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加【jiā】入【rù】约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(Eca-109)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培【péi】养【yǎng】上清，用不含钙【gài】、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观【guān】察细胞【bāo】消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部 分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加【jiā】少量培养【yǎng】基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿【mǐn】中。
细胞冻存：待细【xì】胞【bāo】生长状态【tài】良好【hǎo】时，可【kě】进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后【hòu】加入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血清的培养基后 加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在【zài】二级【jí】生物安全台【tái】内【nèi】操作，并请注意【yì】防护，所有【yǒu】废液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭【miè】菌【jun1】后方能丢弃瓶中【zhōng】。
 
人食管癌细胞(Eca-109)细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收到【dào】细胞后， 可在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于【yú】洁净操作【zuò】台弃【qì】去【qù】上清，加入推【tuī】荐 使【shǐ】用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养瓶中培【péi】养，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见细【xì】胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。