人原位胰腺腺癌细胞（BxPC-3）

人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)
细胞介绍：
该细胞株不表【biǎo】达囊肿性纤维【wéi】化跨膜电导调【diào】节子(CFTR)。CFTR阳性的细【xì】胞株是【shì】Capan-l〇
  
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
  
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存管迅速放入37°C水浴【yù】中【zhōng】（水面要低于冻存管【guǎn】盖部）摇晃解冻，移入【rù】事先准【zhǔn】备好【hǎo】的含有4mL培养基的15ml离心管【guǎn】中混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，加【jiā】入【rù】lmL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液移入【rù】含有5ml培养基的培【péi】养瓶【píng】中培养过夜。第二天【tiān】换液并检【jiǎn】查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观【guān】察【chá】细【xì】胞消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】入3ml此细胞的 培养【yǎng】基终止消化。轻轻吹【chuī】打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心【xīn】4分钟【zhōng】， 弃去上清液，加【jiā】入lmL培养液后吹【chuī】匀。移入到事先准备好【hǎo】的含有【yǒu】5ml培【péi】养基的T-25培【péi】养瓶【píng】中或【huò】含有14ml培【péi】养基【jī】的T-75培养瓶中【zhōng】培养。
细胞冻存【cún】：待细胞生长状态【tài】良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞冻存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，先要【yào】消化处理并进【jìn】行【háng】细胞计数。消化【huà】方法按照细胞【bāo】传代方法的【de】9-21步【bù】骤进【jìn】行，后的重悬液使用【yòng】血【xuè】清。悬浮细胞【bāo】直接计数【shù】后离心，用血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管中。本公司按每个【gè】冻存【cún】管细胞数目大【dà】于【yú】1X106个【gè】细胞冻存。
  
注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与【yǔ】我们电联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜在的【de】生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器【qì】皿需要【yào】灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：胰腺；腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
  
人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显微【wēi】镜下确【què】认细【xì】胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置【zhì】于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长满（90%以上）请及时进【jìn】行细胞传代，传代培养【yǎng】用6ml本公【gōng】司【sī】附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请【qǐng】检【jiǎn】查细胞是否污染，若发现【xiàn】污染或疑似污染，请及时与我【wǒ】们【men】取得电【diàn】联【lián】。
细胞用途：仅供使用