小鼠畸胎瘤细胞（P19）

小鼠畸胎瘤细胞(P19)
细胞介绍
加拿大渥太华大学的Me Burney等在1982年【nián】从雄性小鼠畸胎瘤【liú】中分【fèn】离得到的【de】，是【shì】一【yī】种能够在体外培【péi】养的多能干细胞,P19细胞团经【jīng】RA诱导可分化成神经元、胶质细胞【bāo】和纤维母【mǔ】细胞；而经【jīng】二甲基亚砜(DM SO)诱导【dǎo】则分【fèn】化成【chéng】心【xīn】肌、骨骼肌和平滑【huá】肌细胞;在P19细【xì】胞向【xiàng】神经元分化的过程中【zhōng】，神经发育相关基因的【de】表达模式 基本模拟了正常小鼠神经发育过程，因此,P19目前【qián】被用作【zuò】一个【gè】研【yán】究神经发育【yù】的 体外模型【xíng】。P19细胞作为研究神经分化【huà】机制【zhì】的模型【xíng】，显【xiǎn】著区别于其【qí】他细胞系的四 大特【tè】点是：①它【tā】具有正常【cháng】小鼠的二倍【bèi】体核型，细胞【bāo】分裂快【kuài】，可在体外迅【xùn】速大【dà】量扩【kuò】 增【zēng】，多次传代也【yě】不丧失其分化能【néng】力。②P19细胞具有多种分化潜力，不同诱导条【tiáo】 件下可【kě】定向分【fèn】化成【chéng】不同类型的细胞，种植到孕鼠囊胚中能分化成多种【zhǒng】类型【xíng】细胞。 ③根据P19细胞诱导分化分【fèn】阶【jiē】段【duàn】进行的特【tè】点，能将神经分化的早期【qī】机【jī】制与【yǔ】参与【yǔ】 突起延伸的机制分开研究。④该细胞易于转染【rǎn】，且转染后【hòu】仍能正常分化，适于【yú】进 行细【xì】胞基因研究。通过转染正常或突【tū】变的目【mù】的基因，增【zēng】强或【huò】抑制它们【men】的【de】表达【dá】水平 可用于研究这些基因【yīn】在神经【jīng】分化中的作用。另外，利【lì】用【yòng】反义RNA阻断内【nèi】源蛋白【bái】 的表达，可用来观察这些蛋白在神经分化中的作用【yòng】。
(references:
1.张金平等.全反式维【wéi】甲酸体外诱导P19细胞向心肌【jī】方向分化.[」]中国组织化【huà】学与【yǔ】 细胞化学杂志.2012.1
2.梅宇钦【qīn】等.建【jiàn】立经优化的促P19鼠胚胎【tāi】癌细胞神经分化模【mó】型.浙江大学【xué】学报（医 学版）2012.04)
 
细胞特性
1)来源：胚胎；崎胎癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：可选择干冰运输【shū】及发【fā】送【sòng】复苏存活细胞方式：（1)干冰【bīng】运输，收到后 立即【jí】转【zhuǎn】入液氮冻存或直接复苏；（2)存【cún】活【huó】细胞，收【shōu】到后应继续生长，传代达到细 胞生长【zhǎng】状态良好时【shí】，再进行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】MEMa培养基(MEMa+培养【yǎng】基(GIBCO,添【tiān】加【jiā】NaHC〇31.5g八，肌【jī】醇43.2mg八，叶【yè】酸【suān】8.82mg八,0-巯基乙醇7.8mg八)，90%; BCS，7.5%;胎【tāi】牛血清，2.5%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。
二.细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有1mL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加【jiā】1-2mL培【péi】养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液加【jiā】入【rù】培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二【èr】天换液并【bìng】检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞【bāo】9-21次【cì】。
2■加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37C培【péi】
养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后【hòu】在显微镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶【píng】后【hòu】加少【shǎo】量培养基终【zhōng】止消化。
3.按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心【xīn】4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液按1：2到【dào】1：5的【de】比例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集【jí】细【xì】胞，1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到【dào】1：5的比例分到新的【de】含8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者瓶【píng】中。
方法二：可选择半数换液【yè】方【fāng】式，弃去半数培养基后【hòu】，将剩余细胞悬【xuán】起，将细【xì】胞悬液按1：2到【dào】1：3的【de】比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待细【xì】胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后【hòu】加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含【hán】血【xuè】清【qīng】的培养基后加入冻存管中，再添【tiān】加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻【dòng】存【cún】时，应将细胞收集，1000RPM条件【jiàn】下【xià】离【lí】心4分钟，少量保存上【shàng】清液（防止细胞【bāo】吸走)，加 入部分新鲜【xiān】培养基，加【jiā】入到【dào】冻【dòng】存管中，在冻存管中加入【rù】10%DMSO后【hòu】进【jìn】行冻 存。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰已挥发干【gàn】净【jìng】、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请立即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜【qián】在【zài】的生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台【tái】内操作，并【bìng】请注意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞的器【qì】皿【mǐn】需【xū】要灭菌后方能丢【diū】弃。