小鼠足细胞（MPC-5）

小鼠足细胞(MPC-5)
细胞特性
1)来源：小鼠
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存【cún】：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于【yú】洁净操作台弃去上清【qīng】，加入推【tuī】荐【jiàn】 使【shǐ】用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传【chuán】代达到【dào】细胞生长状态良好时，再【zài】进行冻存。具【jù】体操作【zuò】见【jiàn】细胞培养【yǎng】步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠足细胞(MPC-5)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640培【péi】养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培【péi】养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天【tiān】换液并【bìng】检 查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置【zhì】于37°C培
养箱中消化9-21分【fèn】钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加少量培养【yǎng】基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打【dǎ】匀【yún】后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液【yè】后吹匀。
将【jiāng】细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约【yuē】lml含血清【qīng】的培养基【jī】后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存【cún】。
 
小鼠足细胞(MPC-5)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须【xū】在二级生物【wù】安全台内【nèi】操作【zuò】，并【bìng】请注意【yì】防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。