小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)
细胞介绍
与原始的【de】随机交配3T3和近【jìn】交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3，是【shì】从MH Swiss小鼠【shǔ】胚【pēi】胎培养物中建【jiàn】立的【de】高度【dù】接【jiē】触抑制的【de】连续细胞【bāo】株。为【wéi】了培育在形态【tài】学 特征上更适合于【yú】进行转【zhuǎn】化分析的亚株，建立的MH/3T3细【xì】胞株又进【jìn】行了五【wǔ】轮【lún】以上亚【yà】克隆。这株细【xì】胞【bāo】对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病 毒(鼠【shǔ】痘)阴性。
 
细胞特性
1)来源：胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用含有胎牛血清的【de】2ml冻存管发送存活细【xì】胞【bāo】。收到【dào】细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加【jiā】入推荐使用的培【péi】养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培【péi】养【yǎng】，传代【dài】达到细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备DMEM培养基【jī】(DMEM，GIBCO)，北【běi】美胎牛血【xuè】清【qīng】，15%，1% PS。
2. 培养条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存【cún】管【guǎn】在37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，离心管【guǎn】加入4mL培养基【jī】混合均匀。在800-1000RPM条件下离心9-21分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中 培养【yǎng】，补【bǔ】加培养基至6ml。
2.细胞传【chuán】代：如【rú】果细胞密度【dù】达80%-90%，即【jí】可进行传代培养。
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口【kǒu】 lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶【píng】中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加2ml*培养基终止消化。
轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】5分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，加l-2mL 培养液后【hòu】吹【chuī】匀。
将细胞悬液按【àn】1:2到1:5比【bǐ】例分到新的含【hán】6ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去【qù】培养【yǎng】基后【hòu】，PBS清洗瓶底9-21次后【hòu】加入lml胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入2ml*培养【yǎng】基终止【zhǐ】消化，可【kě】使用【yòng】血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻【dòng】存管中【zhōng】，注【zhù】意冻存 管【guǎn】做好标识【shí】。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细【xì】胞【bāo】冻存。
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至少2个小时以【yǐ】后转入液氮【dàn】灌储存。记录【lù】冻存管位【wèi】置以便下次【cì】拿【ná】取【qǔ】。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液【yè】及【jí】接触【chù】过此细胞【bāo】的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。