小鼠正常肝细胞（NCTC 1469）

小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)
细胞介绍
1952年【nián】建系，源于正常【cháng】C3H/An小【xiǎo】鼠的肝【gān】脏组织，表达H-2K抗原，鼠痘病毒阴性。细【xì】胞特性
1)来源：小鼠的肝组织
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在【zài】显微镜下确认细胞生长【zhǎng】状态【tài】，去掉封【fēng】口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满（90%以上）请【qǐng】及时进行细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本公司附 带【dài】的*培养【yǎng】基【jī】。
5.接到细【xì】胞次日，请【qǐng】检【jiǎn】查细胞是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或疑【yí】似污染【rǎn】，请及时与我 们取得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培【péi】养【yǎng】基(DMEM，GIBCO);马血清，10%;双【shuāng】抗
1%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】迅速放入37°C水浴【yù】中（水面要低 于冻【dòng】存管【guǎn】盖部）摇【yáo】晃解冻，移入【rù】事先准备好【hǎo】的含有4mL培养基的【de】15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液【yè】，加入lmL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细【xì】胞悬液移入含【hán】有【yǒu】5ml培养基的培【péi】养瓶中培【péi】养过夜【yè】。 第二天【tiān】换液【yè】并检查【chá】细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口【kǒu】 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培
养箱中消化【huà】9-21分钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞大部【bù】 分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加入3ml此细胞【bāo】的 培养基终【zhōng】止消化。
轻轻【qīng】吹打后吸出【chū】，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟， 弃去上清液【yè】，加入lmL培【péi】养【yǎng】液后吹匀。
移【yí】入到事先准备好的【de】含有5ml培养基【jī】的【de】T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养 基的【de】T-75培养瓶中培养。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰酶【méi】，细 胞变圆【yuán】脱落后【hòu】，加入【rù】2ml*培养【yǎng】基终止消化，可使用血球计【jì】数【shù】板计【jì】数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用【yòng】血【xuè】清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数【shù】量分配到冻存管中，注意【yì】冻存【cún】 管做好【hǎo】标识。本公【gōng】司按每个冻存管细【xì】胞数【shù】目大于【yú】1X106个细【xì】胞冻存。
将冻存管置于【yú】程序降温盒中，放入-80度冰箱，至【zhì】少2个小时以后转入液氮灌【guàn】储存。记录冻存管位置以便下【xià】次【cì】拿【ná】取。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在【zài】二级【jí】生物安全【quán】台【tái】内操作，并请注意【yì】防护【hù】，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。