病毒转染小鼠细胞（PT-67）

病毒转染小鼠细胞(PT-67)
细胞介绍
PT-67细胞是源于TK-MH/3T3的逆转【zhuǎn】录病毒【dú】包装细【xì】胞。PT67isaretrovirus packagingcelllinederived fromTK-NIH/3T3cells.细胞产生可结合【hé】长【zhǎng】臂【bì】猿白血病病【bìng】毒受体Glvr-1或【huò】双嗜性逆转录病毒受体Ram-1的复制【zhì】缺陷逆转录病毒载体颗粒。
 
细胞特性
1)来源：小鼠成纤维细胞
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用含有【yǒu】胎牛【niú】血【xuè】清的2ml冻【dòng】存【cún】管发送【sòng】存活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清【qīng】，加入【rù】推荐 使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
病毒转染小鼠细胞(PT-67)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBC0, 添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛【niú】血清，10%。（DMEM液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜（或将细胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培【péi】养基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二天【tiān】换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口【kǒu】 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培
养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化。
 按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培【péi】养基，轻【qīng】轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者 瓶中。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进【jìn】行细胞冻存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养基后加入少【shǎo】量【liàng】胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存【cún】管中【zhōng】，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
病毒转染小鼠细胞(PT-67)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞【bāo】有污染，请立即与我们电联【lián】。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均视为有潜在的生【shēng】物【wù】危【wēi】害性，必【bì】须在二级生物安【ān】全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及【jí】接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。