小鼠膀胱癌细胞 （MB49）

小鼠膀胱癌细胞 (MB49)
细胞特性
1)来源：小鼠膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有【yǒu】胎牛【niú】血清【qīng】的【de】2ml冻存管发送存【cún】活【huó】细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作【zuò】台弃去上清，加入【rù】推荐【jiàn】使用的【de】培养基后转移【yí】至l〇cm培养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛
血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿【shī】度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存【cún】。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻【dòng】存【cún】管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】 加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培【péi】养基，培养过夜）。第二【èr】天换【huàn】液【yè】并检【jiǎn】 查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然【rán】后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分【fèn】变圆【yuán】并【bìng】脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补加【jiā】培养【yǎng】基，轻轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。
将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者 瓶中【zhōng】。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴【tiē】壁细胞冻【dòng】存时，弃去培【péi】养基后加【jiā】入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱落【luò】后【hòu】，加【jiā】入约【yuē】lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污染，请立【lì】即与【yǔ】我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞均【jun1】视为【wéi】有潜在的生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二级生物【wù】安全台【tái】内操【cāo】作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的【de】器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。