中国仓鼠 卵巢细胞（CHO-S）

中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)
细胞介绍
贴【tiē】壁【bì】生长及悬浮生【shēng】长均【jun1】可（用于【yú】蛋白表达时，应使【shǐ】用【yòng】悬浮生长【zhǎng】状态，此时细【xì】胞【bāo】生长状态更好【hǎo】，比表面积更高，生【shēng】物反应器中【zhōng】的【de】传质、传热效率更高，同时也可提高生物【wù】反应【yīng】器空间【jiān】使用效率。工业上大规模生【shēng】产单抗，重组蛋，大部分使用悬浮培【péi】养法来生【shēng】产）
 
细胞特性
1  来源：中国仓鼠
2  形态 ：成纤维细胞样
3  含量：>1x10 6 个/mL
4  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输【shū】和保存 ：可选择干冰运输及【jí】发送复苏存活细胞方【fāng】式：（1）干冰运输【shū】，收【shōu】到【dào】后立即转入液氮冻存或【huò】直接复苏；（2）存活【huó】细胞，收到【dào】后应继【jì】续生【shēng】长，传代【dài】达到细胞生长状态良好时【shí】，再【zài】进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培【péi】养步骤。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）培【péi】养【yǎng】基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨【ān】酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请【qǐng】按【àn】照培养基配制说【shuō】明书配制，L-谷【gǔ】氨酰胺配制浓【nóng】度为 200mM，工【gōng】作【zuò】浓度为 8mM（即稀释 25 倍【bèi】，如 500ml CHO Serum-freMedium 中添【tiān】加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂）
2）培【péi】养条【tiáo】件【jiàn】： 气相：空气【qì】，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄【shè】氏度，培养箱湿度【dù】为【wéi】 70%-80%。
3）冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO，现用【yòng】现配。液氮储存。
二． 细胞 处理 ：
传代【dài】、转染、建【jiàn】库及实验室规模小试方【fāng】法：赛百慷（上海）生物【wù】技术股【gǔ】份【fèn】有限【xiàn】公【gōng】司【sī】提供的 CHO-S 细胞为已驯化的细胞，具【jù】有良好的适应【yīng】悬浮生长【zhǎng】及适【shì】应无血清培养基生长特性。
传代 方法：
1.10cm 皿中培养：使【shǐ】用计数器（计数【shù】器【qì】或者血球计数板计数）计数，接种密度为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提前 37℃预热【rè】的新鲜培养基中（建议培【péi】养【yǎng】基取 7-8ml，此时细【xì】胞【bāo】生长状态较【jiào】好），置于摇床上生长【zhǎng】，转速【sù】为【wéi】 120-130rpm，湿度为【wéi】 9-21%，5%二氧化【huà】碳，温度【dù】为 37℃。
2.培养约【yuē】 9-21 天【tiān】，细胞【bāo】密度达到 1×10 6 个活细【xì】胞/ml 时【shí】，应 1000rpm，25℃离【lí】心5min，离心后计数（此时应稀释），然【rán】后【hòu】接【jiē】种密度为【wéi】 3×10 5 个细胞/ml 接种于提【tí】前【qián】 37℃预热的【de】新鲜培养基中。细胞数目足够时，可冻存【cún】。也可选择 125ml 或者 250ml 摇瓶中培养细【xì】胞。（注意细胞【bāo】培【péi】养液体积一般在总体积的五分之一，如【rú】在 125ml 摇瓶中加入 25ml 培【péi】养物【wù】，应注意【yì】在摇瓶【píng】中培养细胞时【shí】应将瓶【píng】盖稍微拧【nǐng】松【sōng】，以【yǐ】便于气体交换，同时也不宜拧得过松，防【fáng】止细【xì】胞污染）
转染 方法：
在【zài】连【lián】续 5 代细【xì】胞密【mì】度未超过 2×10 6 个活细胞/ml 时，可以使用 FreeStyle Max 转染试剂（Gibco，货【huò】号：16447）在【zài】 CD CHO Serum-free Medium 中直接转【zhuǎn】染。（注
意：Anti-Clumping Agent 会干扰 FreeStyle Max 转染试剂转染效【xiào】率【lǜ】，同时也会干扰其【qí】他脂质【zhì】体型转染试【shì】剂【jì】的转染效【xiào】率）
建库方法 ：
若【ruò】需要建库，可将细胞接种于 125ml 摇瓶中（接种密度为 3×10 5 个细胞【bāo】/ml，总体积为 25ml），此方法同样适用于稳定表达所需要【yào】蛋白的细胞株的建库工作【zuò】。建库时，需要先建初级【jí】库【kù】（master bank）（一【yī】般为 10 支，每支细胞总数不【bú】少【shǎo】于 4.5×10 7 个细胞），此【cǐ】步骤结束后【hòu】，从冻存的初级库【kù】中取出一支复苏，按照同样步骤【zhòu】建次【cì】级库（working bank）（相【xiàng】同的，一般【bān】为 10 支【zhī】，每支细胞总数不少【shǎo】于 4.5×10 7个细胞）。实验室 规模小试方法：将【jiāng】挑选【xuǎn】出的稳定细胞株从 96 孔板到 24 孔板到 6 孔【kǒng】板到【dào】 10cm 皿【mǐn】中逐级扩大培养【yǎng】后【hòu】（此时需要注意在培养过程中应及【jí】时保种，以防止后续步骤出现污染，及应对可能的表【biǎo】达【dá】量【liàng】衰退现象）以【yǐ】 3×10 5 个细【xì】胞/ml 接种【zhǒng】于 125ml 摇【yáo】瓶中，转【zhuǎn】速为120-130rpm，温度为 37℃，湿度为 9-21%，连续培养一【yī】周，每天取样做【zuò】出相【xiàng】应的细胞【bāo】生长曲线，细胞【bāo】活【huó】率曲线，蛋白表达曲【qǔ】线【xiàn】，可根据实际情况，每天取样测出【chū】培养基中【zhōng】葡萄【táo】糖含量，以便【biàn】决【jué】定【dìng】是否要【yào】补加【jiā】葡萄【táo】糖【táng】，同时可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作【zuò】为细胞发【fā】酵【jiào】中补料，同时做出相【xiàng】应的细胞生【shēng】长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达【dá】曲线，为中【zhōng】试【shì】放大补料添加做出【chū】合理【lǐ】数据【jù】支持。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)注意事项：
1. 收到细胞【bāo】后，若发现干冰已挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我们电联【lián】。
2. 所有【yǒu】动物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物【wù】安【ān】全台内操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。