中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DHFR）

中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)
细胞介绍
该细【xì】胞为二氢叶酸还原酶【méi】缺陷【xiàn】细胞【bāo】。在没有HT (胸腺嘧啶）时细胞会死亡【wáng】。细胞培【péi】液中加氨甲【jiǎ】喋【dié】呤可以【yǐ】防止对药物低抗【kàng】性的回变细胞的【de】生长。
 
细胞特性
1)来源：中国仓鼠
2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存【cún】管【guǎn】包装运输【shū】和【hé】保存：可【kě】选择干冰运【yùn】输及发送复苏存活细【xì】胞方式：（1)干冰运【yùn】输，收到【dào】后立即转入液氮冻存或直【zhí】接复苏；（2)存活细【xì】胞，收到后【hòu】应继续生长，传代【dài】达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见细胞【bāo】培【péi】养步骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】IMDM培养基(GIBCO);胎牛血【xuè】清，15%，双抗【kàng】1%;用于表达【dá】蛋白时，也可使用悬【xuán】浮培【péi】养基，使细胞【bāo】悬浮生长。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】（或将
细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第【dì】二天换液【yè】并检查【chá】细胞【bāo】密度。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进【jìn】行【háng】传代培【péi】养。对【duì】于贴壁细胞，传代【dài】可参考以下方法：弃【qì】去培养上清，用【yòng】不【bú】含【hán】钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱【xiāng】中消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养【yǎng】基【jī】终止按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃，补【bǔ】加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者【zhě】瓶【píng】中【zhōng】。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃【qì】去培养【yǎng】基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基【jī】终止消化，可使用血球计数【shù】板【bǎn】计数。1000RPM离心【xīn】5分钟【zhōng】去掉上清。用【yòng】血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻存管中【zhōng】，注意冻【dòng】管做好标识。本公司【sī】按每【měi】个冻存管细【xì】胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。将冻存管置【zhì】于程序【xù】降温盒中【zhōng】，放入【rù】-80度冰箱，至【zhì】少2个小【xiǎo】时【shí】以后转入液【yè】氮灌储【chǔ】存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发【fā】现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生物危害性，必须【xū】在二级生物安全台【tái】内操作，并请注【zhù】意防【fáng】护，所有废液【yè】及接触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。