鸡淋巴瘤细胞（DT40）

鸡淋巴瘤细胞(DT40)
细胞介绍
DT40是来自HylineSC鸡法氏囊【náng】淋巴细胞株经鸟类【lèi】白血病病【bìng】毒诱导【dǎo】建株的。原始淋巴瘤用罗氏【shì】相关病【bìng】毒l(RAV-l)感染出生1天的小鸡得到。法氏囊中的【de】肿瘤制【zhì】成【chéng】细胞悬液后【hòu】通过静脉注射【shè】输入同基因【yīn】型的受体小【xiǎo】鸡。经过【guò】一次体内移植后，建立【lì】了 DT40细胞【bāo】株。这株细胞包含的前病毒基因整合【hé】在【zài】c-myc原癌【ái】基因的上游，表达【dá】的c-myc RNA水平较高【gāo】。它缺少一个正常【cháng】c-myc基因，但含【hán】有两个拷贝ALV去调控的myc基因。这株细胞保留了重排【pái】免疫球【qiú】蛋白轻链基因(IgL)的能【néng】力【lì】。在IgL位点，DT40包含一个重【chóng】排和一个胚【pēi】系同源基因。c-rel基因和【hé】v-rel癌【ái】基因在DT40细胞株中都【dōu】能诱导组织相容性(MHC)II类抗原表达。v-rel诱【yòu】导的【de】MHCII表达比【bǐ】c-rel诱导快【kuài】，且其有效性在数周【zhōu】后达到crel的50倍。这株细胞【bāo】呈淋巴【bā】母细胞表【biǎo】型【xíng】。传染性检【jiǎn】测表明DT40释放【fàng】低水平【píng】的传染性RAV-1。这株细胞【bāo】可以用于稳【wěn】转研究。
 
细胞特性
1)来源：鸡淋巴瘤
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格【gé】：T25瓶或者lmL冻存【cún】管【guǎn】包装运输和【hé】保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活【huó】细胞【bāo】。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推荐使用的培【péi】养基后转移至【zhì】l〇cm培【péi】养或【huò】者T25培养瓶【píng】中培【péi】养【yǎng】，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，85%;胎牛血清，10%，鸡血清，5%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解【jiě】冻【dòng】，加入【rù】4mL培养基混【hún】合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养【yǎng】过【guò】夜（或将细【xì】胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】查细胞密【mì】度。细胞传代：如果【guǒ】细胞密【mì】度【dù】达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞【bāo】，1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液【yè】后吹匀，将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分到新【xīn】的含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方【fāng】式，弃去【qù】半数培养基后，将剩余细【xì】胞悬起【qǐ】，将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者瓶中。细胞冻【dòng】存【cún】：待细胞生长状态【tài】良【liáng】好时，可进行细胞冻存。悬【xuán】浮细胞冻存时，应【yīng】将【jiāng】细胞收集，1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟【zhōng】，少量【liàng】保存【cún】上清【qīng】液（防止【zhǐ】细胞吸走【zǒu】)，入部分【fèn】新鲜培养基，加入【rù】到冻存管中【zhōng】，在冻存管中【zhōng】加入10%DMSO后进行冻存。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损【sǔn】及细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二【èr】级生物安全台【tái】内【nèi】操【cāo】作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过【guò】此细胞的器皿需【xū】要灭菌【jun1】后方能丢【diū】弃。