人结直肠腺癌细胞（Caco-2）

人结直肠腺癌细胞(Caco-2)
细胞介绍：
这【zhè】株细胞分离自直肠【cháng】原位癌【ái】。当长到满时，细胞表现出【chū】特征【zhēng】性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维【wéi】甲【jiǎ】酸结合蛋白【bái】I和维【wéi】甲酸结【jié】合蛋白II，并呈角质蛋白阳【yáng】性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准【zhǔn】备MEM培【péi】养基（GIBCO,，80%;胎牛血【xuè】清，20%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄【shè】氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中【zhōng】培养过夜【yè】（或将细胞悬液加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培【péi】养基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并【bìng】检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力【lì】口【kǒu】2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞大【dà】部分变圆并【bìng】脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。
 
细胞【bāo】冻存：待【dài】细【xì】胞【bāo】生【shēng】长状态良好时【shí】，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃 去培养【yǎng】基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加【jiā】入约lml含血清的培养【yǎng】基后加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电联【lián】。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有【yǒu】废液及【jí】接触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃【qì】瓶中。
 
细胞特性：
1)来源：结肠，结直肠腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)运输和保存：可选【xuǎn】择干冰【bīng】运输及发送复苏【sū】存【cún】活细【xì】胞方式：（1)干冰运【yùn】输【shū】，收【shōu】到后【hòu】 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续【xù】生长，传代达到细【xì】胞生长状态【tài】良【liáng】好时，再【zài】进行冻【dòng】存。具体操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。