罗西奥病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：罗西奥病毒PCR检测试剂盒

英文名称：Rocio VirusRTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色【sè】液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产【chǎn】品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主【zhǔ】要有五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，罗西奥病毒PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特【tè】异性取【qǔ】决于【yú】引物与模板DNA互补的程度。理【lǐ】论【lùn】上，只要知道任何一段模板DNA序列【liè】， 就【jiù】能按其设【shè】计互补【bǔ】的寡核苷【gān】酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩【kuò】增【zēng】跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长【zhǎng】至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以【yǐ】9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩增【zēng】效果不【bú】佳，G+C过多【duō】易出现非特异条带【dài】。ATGC*随机分布，避【bì】免5个【gè】以上【shàng】的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物内部出现二【èr】级结构【gòu】，避免两条引物【wù】间互补，特别【bié】是3'端的互补，否则会【huì】形成【chéng】引物二聚体【tǐ】，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特【tè】别是末【mò】及倒数第二【èr】个碱基，应【yīng】严【yán】格要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加【jiā】上合适的酶【méi】切位点， 被【bèi】扩增的靶序列【liè】*有适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶【méi】切【qiē】分【fèn】析或分子克隆【lóng】很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引【yǐn】物应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无【wú】明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物【wù】量产生所需要的结果为好【hǎo】，引物浓度偏高会引起【qǐ】错配和【hé】非特【tè】异【yì】性扩增，且【qiě】可增加引【yǐn】物之间形成【chéng】二聚体的机会【huì】。