莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

英文名称：Rickettsia mooseriPCR

准备物品：

清【qīng】理液【yè】（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五种【zhǒng】即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引物与【yǔ】模板DNA互补的程度。理论【lùn】上，只要知道【dào】任何一段模【mó】板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物，利用PCR就【jiù】可【kě】将模板【bǎn】DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应遵循【xún】以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条件下【xià】可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-21%为宜，G+C太【tài】少【shǎo】扩增效果不佳，G+C过多【duō】易出现非特【tè】异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的【de】嘌【piào】呤或嘧啶核苷【gān】酸【suān】的成串排列【liè】。

④避免【miǎn】引物内部【bù】出现二级【jí】结构，避免【miǎn】两条【tiáo】引【yǐn】物间互补，特别是3'端的【de】互补，否则会形成引物二聚体【tǐ】，产生非特异的扩增条【tiáo】带。

⑤引物3'端的碱基，特别是【shì】末及倒【dǎo】数第二【èr】个【gè】碱基，应严格【gé】要求配对，以【yǐ】避免因末端碱基不配【pèi】对【duì】而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适【shì】宜的酶切位点， 这【zhè】对酶切分析【xī】或分子克【kè】隆很【hěn】有【yǒu】好处【chù】。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应【yīng】与核酸【suān】序列数据库的其它序列无明显同源【yuán】性【xìng】。

引物量：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产【chǎn】生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度偏高【gāo】会引起【qǐ】错配和【hé】非【fēi】特【tè】异性扩增，且【qiě】可增加引物之间形成二聚体的机会。