耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

英文【wén】名称：VancomycinResistant Enterococcus(VRE)PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微升【shēng】

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要有【yǒu】五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性取决于引物与模板DNA互【hù】补的程度【dù】。理论上，只【zhī】要【yào】知【zhī】道任何一段模板DNA序列， 就能【néng】按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体外大【dà】量扩【kuò】增【zēng】。设【shè】计引物【wù】应遵【zūn】循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下可【kě】扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩【kuò】增【zēng】效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带【dài】。ATGC*随机分布，避免5个以上的【de】嘌呤或嘧啶核【hé】苷【gān】酸的【de】成串排列【liè】。

④避免引物【wù】内部【bù】出现二级结构【gòu】，避免【miǎn】两条引物间互补，特别是3'端【duān】的互【hù】补【bǔ】，否则会形成引【yǐn】物二聚体，产生非特【tè】异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末及倒数【shù】第二个碱基，应严【yán】格要求配对，以避免因末【mò】端【duān】碱基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序【xù】列*有适【shì】宜的【de】酶【méi】切位点【diǎn】， 这对酶切分【fèn】析或分子克【kè】隆很有好【hǎo】处。

⑦引【yǐn】物的特【tè】异性：引物应与【yǔ】核【hé】酸序列数据库的其它序列无明显同源性【xìng】。

引物量：每条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量产【chǎn】生所需要的结果为好，引物浓度偏【piān】高会引起错配和非特【tè】异性扩【kuò】增，且可增加引物之【zhī】间形成二聚体的机会【huì】。