木丝霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：木丝霉PCR检测试剂盒

英文名称：Xylohypha bantaniaPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫【háo】升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．片PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应【yīng】的物质主要有五种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模【mó】板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，木丝霉PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异【yì】性取决于【yú】引物与模板DNA互补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任【rèn】何一段【duàn】模板DNA序列， 就能按其【qí】设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物【wù】，利用PCR就【jiù】可【kě】将模板DNA在体外大量扩【kuò】增。设计引物应【yīng】遵循以【yǐ】下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定【dìng】条件下可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太【tài】少扩增效果不【bú】佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异【yì】条【tiáo】带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧【mì】啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物内部【bù】出【chū】现二级结构，避免两【liǎng】条【tiáo】引物间【jiān】互补，特别是3'端的互【hù】补，否则会形成引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩【kuò】增条带。

⑤引物3'端的【de】碱基【jī】，特别是末及倒数第二【èr】个【gè】碱【jiǎn】基，应严格要求【qiú】配对，以避免【miǎn】因末端碱基不【bú】配对而导【dǎo】致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或能【néng】加上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的【de】靶序列*有适宜的酶切位【wèi】点， 这【zhè】对【duì】酶切分析或分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特异性：引物应【yīng】与核酸序【xù】列数据库【kù】的其它序列无明【míng】显同【tóng】源性【xìng】。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产【chǎn】生所需要的结果为好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加【jiā】引【yǐn】物之间形成二聚体的【de】机【jī】会。