肯塔基沙门氏菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：肯塔基沙门氏菌PCR检测试剂盒

英文名称：Salmonella kentuckyPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物【wù】质主要有【yǒu】五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，肯塔基沙门氏菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于【yú】引【yǐn】物与模【mó】板DNA互补的【de】程【chéng】度。理【lǐ】论上，只要知道任【rèn】何一段模【mó】板DNA序列， 就【jiù】能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下【xià】可扩增长【zhǎng】至10kb的片段【duàn】。

③引物【wù】碱基：G+C含量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出现非【fēi】特异条带。ATGC*随【suí】机【jī】分布【bù】，避免5个【gè】以【yǐ】上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避【bì】免引物内部出现【xiàn】二级结构，避免两条【tiáo】引物【wù】间互补，特别是3'端的互补，否则会【huì】形成引物二聚体，产生非【fēi】特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的碱基，特【tè】别【bié】是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格要求【qiú】配对，以【yǐ】避免因末端碱基不配对而导【dǎo】致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有或能加上【shàng】合适的酶切位【wèi】点， 被【bèi】扩【kuò】增【zēng】的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶【méi】切【qiē】分析【xī】或分子克隆很有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物【wù】应【yīng】与核酸序列数据库的其【qí】它序列【liè】无【wú】明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引【yǐn】物量产生所需要的结【jié】果为好，引物浓度【dù】偏高会引起错配和非特异性扩增【zēng】，且可【kě】增加引【yǐn】物之间形成二聚【jù】体的机会。