科恩酒曲菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：科恩酒曲菌PCR检测试剂盒

英文名称：Rhizopus cohniiPCR

准备物品：

清【qīng】理液【yè】（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，科恩酒曲菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理【lǐ】论上，只要知道任何一段【duàn】模板DNA序【xù】列， 就能【néng】按其设计互补【bǔ】的寡【guǎ】核苷酸链做【zuò】引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引【yǐn】物应遵循以【yǐ】下【xià】原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特【tè】定【dìng】条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多【duō】易出现【xiàn】非特异条【tiáo】带。ATGC*随【suí】机分布【bù】，避免5个以上【shàng】的嘌呤【lìng】或【huò】嘧【mì】啶核苷酸的成串排列。

④避免引物【wù】内部【bù】出现二【èr】级结构，避【bì】免两条引物间互补，特别是3'端【duān】的互补，否则会形【xíng】成引【yǐn】物二聚【jù】体，产生非特异【yì】的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是【shì】末及倒数第二【èr】个碱基，应严格要【yào】求【qiú】配对【duì】，以避免因末【mò】端碱基不配对而【ér】导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中有或【huò】能加【jiā】上合适的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶【bǎ】序列*有适【shì】宜的酶切位点【diǎn】， 这【zhè】对酶切分析或【huò】分子克隆【lóng】很有好处。

⑦引【yǐn】物的【de】特异【yì】性：引物【wù】应【yīng】与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引【yǐn】物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结【jié】果为好，引物浓【nóng】度偏高会引【yǐn】起【qǐ】错配【pèi】和非特异性【xìng】扩【kuò】增，且可增加【jiā】引物之间形成二聚体的机会。