轮状病毒通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：轮状病毒通用PCR检测试剂盒

英文名称：Rotavirus RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀【xī】释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五种【zhǒng】即引【yǐn】物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，轮状病毒通用PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性取决于引【yǐn】物与模【mó】板【bǎn】DNA互补的程度。理论【lùn】上【shàng】，只【zhī】要知道【dào】任【rèn】何一段模板【bǎn】DNA序列， 就能按【àn】其设计互补的寡核苷酸链做引物【wù】，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜【yí】，G+C太少【shǎo】扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易【yì】出现非特异条带。ATGC*随机分布【bù】，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串【chuàn】排列。

④避免引物【wù】内部出现二级【jí】结构，避免两条引物间互补，特别【bié】是3'端【duān】的互补，否则会形【xíng】成引物二聚体，产生【shēng】非特【tè】异【yì】的扩增条【tiáo】带。

⑤引【yǐn】物3'端【duān】的【de】碱基，特别是末【mò】及【jí】倒数第二个碱基，应严格要【yào】求【qiú】配对，以【yǐ】避免因末端碱基不配对而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有或能加上【shàng】合【hé】适的【de】酶切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适宜的酶切位【wèi】点， 这对酶切【qiē】分析或分子【zǐ】克隆很有好【hǎo】处。

⑦引【yǐn】物【wù】的特异性【xìng】：引物应与【yǔ】核酸序【xù】列数【shù】据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条【tiáo】引【yǐn】物【wù】的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生【shēng】所需要的结果为好，引物浓【nóng】度偏高【gāo】会引起错配和【hé】非特异性扩增，且可增加【jiā】引物之间形成【chéng】二聚体的机会。