轮状病毒qunPCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：轮状病毒quPCR检测试剂盒

英文名称：Rotavirus A ARTPCR

准备物品：

清【qīng】理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要有五种即引物、酶【méi】、dNTP、模【mó】板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，轮状病毒qunPCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物【wù】与【yǔ】模板DNA互【hù】补的程度【dù】。理论上【shàng】，只要知道【dào】任何一【yī】段模【mó】板DNA序【xù】列， 就能按其设计互【hù】补的寡核苷酸链做引【yǐn】物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量【liàng】扩【kuò】增。设计引物【wù】应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨【kuà】度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条件下可扩【kuò】增长至【zhì】10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果不【bú】佳【jiā】，G+C过多【duō】易出现非特异条带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个【gè】以上的【de】嘌【piào】呤或嘧啶核苷酸的成【chéng】串【chuàn】排列【liè】。

④避免【miǎn】引物内部出现二【èr】级结构，避免【miǎn】两条引物间互补，特别【bié】是3'端的互补，否则【zé】会形成引物二聚体，产生非特异的扩【kuò】增【zēng】条带。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是【shì】末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格要求配对，以避【bì】免因末端碱基不配【pèi】对【duì】而【ér】导致PCR失【shī】败。

⑥引物中有或能【néng】加上合适的【de】酶【méi】切位点， 被扩增的靶序【xù】列*有适宜的酶切位点， 这对酶【méi】切【qiē】分析或分子克隆很有好【hǎo】处。

⑦引【yǐn】物【wù】的特异性：引物应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列【liè】无明显同【tóng】源性【xìng】。

引物量：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所【suǒ】需要的结果为好【hǎo】，引物浓度偏高会引起错配和【hé】非特【tè】异性【xìng】扩增，且可增加引物之间形成【chéng】二聚体的机会。