链霉菌通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：链霉菌通用PCR检测试剂盒

英文名称：Streptomyces spp.PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫升

染【rǎn】色液（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的【de】物质主【zhǔ】要【yào】有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，链霉菌通用PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物【wù】的特异性取决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上，只要知道任何【hé】一段【duàn】模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计互补的寡核苷酸链【liàn】做引【yǐn】物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设计【jì】引物应遵【zūn】循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下【xià】可扩增长至【zhì】10kb的片段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出现非特异条带【dài】。ATGC*随机【jī】分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的【de】成【chéng】串排【pái】列。

④避【bì】免【miǎn】引物内部出现二【èr】级结构，避免两【liǎng】条引物间互补【bǔ】，特别是3'端的互补，否则【zé】会形成引物二聚体【tǐ】，产生非特异【yì】的扩增条【tiáo】带。

⑤引物3'端的碱【jiǎn】基，特别【bié】是末及倒数第二个碱基，应严格要【yào】求配对，以避免因末端碱基【jī】不配对【duì】而【ér】导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有【yǒu】或【huò】能加【jiā】上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适宜的酶切位点， 这对酶切分【fèn】析或分子克隆很【hěn】有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸【suān】序列数据库的【de】其它序列无【wú】明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所需【xū】要【yào】的结果为好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错配【pèi】和非【fēi】特异【yì】性扩增，且可增加引物之间形成【chéng】二聚体【tǐ】的机会。