立克次体通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：立克次体通用PCR检测试剂盒

英文名称：Rickettsia spp.PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升【shēng】

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                    1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反【fǎn】应的物质【zhì】主要有五种即引物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，立克次体通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的【de】程【chéng】度。理论上【shàng】，只要知【zhī】道任【rèn】何【hé】一段模板【bǎn】DNA序【xù】列， 就能按其设计互【hù】补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体【tǐ】外【wài】大量【liàng】扩增。设计引物应【yīng】遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定【dìng】条件下可扩增【zēng】长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果【guǒ】不佳【jiā】，G+C过多易【yì】出现非【fēi】特【tè】异条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个以上的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的【de】成串排列【liè】。

④避免引物【wù】内【nèi】部出现二级【jí】结构，避免【miǎn】两条引【yǐn】物【wù】间互补，特别是【shì】3'端的互补，否则会【huì】形成引物【wù】二聚体【tǐ】，产生非特异的扩增条带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特别是末及【jí】倒【dǎo】数【shù】第【dì】二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱【jiǎn】基【jī】不配对而【ér】导致PCR失败。

⑥引物【wù】中有或能加上合【hé】适的酶切位点， 被【bèi】扩【kuò】增的靶序列*有适宜的酶切位【wèi】点， 这对酶切分【fèn】析或分【fèn】子克隆很有好【hǎo】处。

⑦引物的【de】特异性【xìng】：引物【wù】应与核酸序列数据库的其【qí】它【tā】序列无明显同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产【chǎn】生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错配和【hé】非特异性扩增【zēng】，且【qiě】可增加引物之【zhī】间形【xíng】成二聚体的机会。