劳斯伴随病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：劳斯伴随病毒PCR检测试剂盒

英文名【míng】称：Rous Associated Virus（RAV）RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说【shuō】明书                                      1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要【yào】有五种即【jí】引物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，劳斯伴随病毒PCR检测试剂盒CR 产【chǎn】物【wù】的特异性【xìng】取决于引物【wù】与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上，只要知道任何【hé】一段模板DNA序列， 就能按【àn】其设计互补的【de】寡核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体【tǐ】外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可【kě】扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基：G+C含量【liàng】以9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易出现【xiàn】非特【tè】异【yì】条带。ATGC*随【suí】机【jī】分【fèn】布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物【wù】内部出【chū】现【xiàn】二级结构，避【bì】免两条【tiáo】引物间【jiān】互补，特别是3'端的互【hù】补，否则会形成引【yǐn】物二聚体，产生非特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物【wù】3'端的碱【jiǎn】基，特别是【shì】末及倒【dǎo】数第二个碱基，应严格要求配对，以避【bì】免【miǎn】因末端碱基不配对而【ér】导【dǎo】致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切【qiē】位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适【shì】宜的酶切位【wèi】点， 这对酶【méi】切【qiē】分析或分【fèn】子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特【tè】异【yì】性：引物应【yīng】与核酸序列数据库的其它序列无明显【xiǎn】同源【yuán】性。

引【yǐn】物量：每条【tiáo】引物的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所需要的结果为好，引物【wù】浓【nóng】度【dù】偏高会引起【qǐ】错配和非特异【yì】性扩增，且可增加引【yǐn】物之【zhī】间形成二聚体的机会。