莱氏泰勒虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：莱氏泰勒虫PCR检测试剂盒

英文名称：Theileria lestoquardiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品说【shuō】明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，莱氏泰勒虫PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性取决【jué】于引物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上，只【zhī】要知道任何一段模【mó】板DNA序【xù】列【liè】， 就能按【àn】其设【shè】计互补的寡核苷酸【suān】链做引物，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在体外大量扩【kuò】增。设计引物应遵【zūn】循以【yǐ】下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特【tè】定【dìng】条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含量以9-22%为宜【yí】，G+C太【tài】少扩【kuò】增效【xiào】果不佳，G+C过【guò】多易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成【chéng】串【chuàn】排列【liè】。

④避免引物内部出现二【èr】级【jí】结构，避免两条引物间互【hù】补【bǔ】，特别是3'端的互补，否则【zé】会形【xíng】成【chéng】引物二聚体【tǐ】，产生非【fēi】特异的扩【kuò】增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严【yán】格要【yào】求【qiú】配对，以避【bì】免因末【mò】端碱基不配对【duì】而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能加上【shàng】合适【shì】的酶切位点， 被扩增【zēng】的【de】靶【bǎ】序【xù】列【liè】*有适宜的酶【méi】切位点， 这对酶切分【fèn】析或分【fèn】子克隆很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物应与核酸序列【liè】数据库的其【qí】它序列【liè】无明显【xiǎn】同源性。

引物【wù】量【liàng】：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物【wù】量产生所需【xū】要的【de】结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩【kuò】增【zēng】，且可增加引物之间形成二聚体的机【jī】会。