猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒

英文名称：Porcine Sapovirus（PoSaV）（）RTPCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                    毫升

染色【sè】液（t B）                                  微升

稀释【shì】液（C）                                    毫升

溶解【jiě】液【yè】（tD）                                   毫升

产品【pǐn】说明【míng】书                                      1份

注意事项：

1．基础程序

2．扩增温度和延伸温度

3．反应时间

4．循环次数

5．PCR 反应液的配制

6．PCR技术的基本原理

7．PCR的反应动力学

8．PCR扩增产物

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要【yào】有五【wǔ】种即【jí】引物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物【wù】是PCR特异性反【fǎn】应的关键，PCR 产物的特【tè】异性取决【jué】于引【yǐn】物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论【lùn】上【shàng】，只要知道任何一段模板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体【tǐ】外【wài】大量扩增。设【shè】计引物应遵循以【yǐ】下原则【zé】：

① 引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

② 引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可【kě】扩【kuò】增长至10kb的片段。

③ 引物碱基：G+C含【hán】量以【yǐ】9-21%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果不佳【jiā】，G+C过多易【yì】出现非【fēi】特异条带【dài】。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶核苷酸的成串排【pái】列【liè】。

④ 避免引【yǐn】物【wù】内部出现二级结构，避免两条引【yǐn】物【wù】间互补【bǔ】，特别是3'端【duān】的【de】互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的【de】扩增【zēng】条带【dài】。

⑤ 引物3'端的碱【jiǎn】基，特别【bié】是末及【jí】倒【dǎo】数第二【èr】个碱基【jī】，应严格要求配对【duì】，以【yǐ】避【bì】免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥ 引物中有或能【néng】加上【shàng】合适的酶切位点， 被扩增【zēng】的靶【bǎ】序【xù】列*有适宜【yí】的【de】酶切位点， 这对酶切分析或分子【zǐ】克【kè】隆很有【yǒu】好处。

⑦ 引物的特异【yì】性：引物应与核酸【suān】序列数据库的其它【tā】序列无明显同【tóng】源【yuán】性。

猪札如病毒札幌病毒PCR检测试剂盒 引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要【yào】的【de】结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特【tè】异性扩增，且可增【zēng】加引物【wù】之间形【xíng】成【chéng】二聚体【tǐ】的机会。