卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒

英文名称：Cladosporium carrioniiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应【yīng】的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异【yì】性取决【jué】于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上，只要知道任何一段模板DNA序【xù】列， 就能按【àn】其设计互补的寡【guǎ】核【hé】苷酸链做【zuò】引物，利用PCR就可将模板【bǎn】DNA在体外大量扩【kuò】增。设计【jì】引【yǐn】物应遵【zūn】循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特【tè】定条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段。

③引【yǐn】物【wù】碱基【jī】：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过【guò】多易【yì】出现非特异【yì】条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避【bì】免5个以上的嘌呤或嘧啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物内部出现【xiàn】二级结【jié】构，避免【miǎn】两条引物间互补，特别是3'端的互【hù】补，否则会形成【chéng】引物【wù】二【èr】聚体【tǐ】，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别是【shì】末及【jí】倒数第二个碱基【jī】，应严格要求配【pèi】对，以避【bì】免因末端碱基【jī】不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物中【zhōng】有【yǒu】或能【néng】加上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的靶序【xù】列【liè】*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或【huò】分子克隆很【hěn】有好处。

⑦引【yǐn】物的特【tè】异性：引物应与核酸【suān】序列数【shù】据库【kù】的其它序列无明显【xiǎn】同源性。

引物【wù】量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所【suǒ】需要的结果为好，引物【wù】浓度【dù】偏【piān】高会引起错配和非【fēi】特异性【xìng】扩【kuò】增，且可增加引物之间形成二聚体【tǐ】的机【jī】会。