寄生曲霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：寄生曲霉PCR检测试剂盒

英【yīng】文【wén】名称：Aspergillus parasiticusPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品【pǐn】说明书                                      1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的【de】物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，寄生曲霉PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性取决于引物与【yǔ】模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任【rèn】何一段【duàn】模板【bǎn】DNA序列， 就能按其设计互补【bǔ】的寡核【hé】苷酸链做【zuò】引物，利【lì】用PCR就可将【jiāng】模板DNA在体外【wài】大量扩【kuò】增。设计【jì】引【yǐn】物应遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩【kuò】增【zēng】效果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异【yì】条带。ATGC*随机【jī】分布，避免5个以【yǐ】上的嘌【piào】呤【lìng】或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。

④避免【miǎn】引物内【nèi】部出现二级结构，避免两条引物间互【hù】补，特【tè】别是3'端的【de】互【hù】补，否则会形成引物二【èr】聚体，产生非特异【yì】的扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒数第二个碱基，应严格要【yào】求配对，以避免因【yīn】末【mò】端碱基不【bú】配对而导【dǎo】致PCR失【shī】败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜【yí】的酶切位点， 这对酶【méi】切分析或分【fèn】子克隆很【hěn】有【yǒu】好【hǎo】处。

⑦引物【wù】的特异性：引物【wù】应与核【hé】酸【suān】序列数据【jù】库的其它序列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物【wù】的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所【suǒ】需要【yào】的结【jié】果为好，引【yǐn】物浓度偏高会引起错配和非【fēi】特异性扩增，且可增加引【yǐn】物【wù】之间形成二聚体【tǐ】的机会。