大鼠 KAF ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 KAF ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使【shǐ】用前将各种试剂【jì】取出放置30分钟，平衡至室温【wēn】，所有标【biāo】准品【pǐn】和样品必需设置平行【háng】对照实验，快速加入试剂至【zhì】样品中，立【lì】即漩【xuán】涡震荡2秒【miǎo】混匀。

1. 依【yī】据实验键盘纸决【jué】定酶标条的【de】使【shǐ】用量，将剩【shèng】余的酶【méi】标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封【fēng】，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各【gè】个微孔中，除了【le】TA（全活性）孔和Blank（空白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异【yì】结合)孔和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准【zhǔn】品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB（非特【tè】异结合）孔。

7. 移取50μL 偶联酶至【zhì】各孔中，除了TA（全【quán】活【huó】性）孔和【hé】Blank（空白【bái】）孔【kǒng】。

8. 移取50μL 抗体工【gōng】作液至各孔中，除了TA（全活性【xìng】）孔、Blank（空【kōng】白【bái】）孔【kǒng】和NSB（非特异结合）孔。

9. 将酶标【biāo】孔置于孔板振动器【qì】上，250~500rpm，室【shì】温孵【fū】育2小时。

10. 在吸水纸【zhǐ】上拍【pāi】干【gàn】微孔内【nèi】溶液，加洗涤液400μL每【měi】孔【kǒng】洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗【xǐ】涤，清空各【gè】微孔【kǒng】，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以【yǐ】确保没【méi】有洗【xǐ】涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温【wēn】静置5~30分钟【zhōng】。（显【xiǎn】色底物A和B需在临【lín】用前15分钟【zhōng】内等体积【jī】混合，并避光【guāng】放【fàng】置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清【qīng】除酶标仪Blank（空白）孔值，读取450nm处的光【guāng】密度值【zhí】，在570nm至590nm之间好有修正【zhèng】，如果酶标【biāo】仪不能自动【dòng】清除Blank(空白【bái】)孔值【zhí】，那么手动扣除【chú】每个读数的Blank（空白）孔光密度【dù】值。

注意事项：

1. 用户在初次使【shǐ】用试剂盒时，应将各种试【shì】剂【jì】管离心数【shù】分【fèn】钟，以便试【shì】剂集中到【dào】管底。

2. 每【měi】次【cì】实验【yàn】留一孔作为空白【bái】调【diào】零【líng】孔，该孔不加任何试剂，只【zhī】是zui后加底物溶液及2N H2SO4，测量时先用此【cǐ】孔调OD值至【zhì】零。

3. 为防【fáng】止样品蒸发，试验时将反应板放于【yú】铺有湿布的【de】密闭【bì】盒内，酶标板加【jiā】上盖或覆膜。

4. 未使【shǐ】用完【wán】的酶标板或者试剂，请于9-21℃保存，标准品【pǐn】、生【shēng】物-素标【biāo】记【jì】抗体工作液、辣根过【guò】氧化物酶标【biāo】记【jì】亲和素工作液请【qǐng】依【yī】据所需的量配置使用，请勿重复使用【yòng】已【yǐ】稀释过的标准品、生物-素【sù】标【biāo】记抗体工作液或、辣根过氧化物【wù】酶标记亲【qīn】和素工作【zuò】液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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