对于ELISA试剂盒检测【cè】样品的处【chù】理【lǐ】方法很【hěn】多实验新手还不是很【hěn】清楚，咨【zī】询这【zhè】方面问题【tí】的客户也较多，以【yǐ】下【xià】为上海【hǎi】酶联生物技术部整理出的ELISA试剂盒检测样品的处理【lǐ】方法：
 

　　1、 血清
 

　　血【xuè】清是zui常用于ELISA检测的一类样本【běn】，处理也【yě】比较简单。
 

　　用【yòng】无热原【yuán】、无内毒素【sù】的试管或【huò】离心管【guǎn】采集血液【yè】标本，将【jiāng】试管【guǎn】或离心管室温【wēn】放置2小时或4℃过一夜，使【shǐ】血清析出。(将试【shì】管或离心管倾斜放置，使液【yè】面横截面增大，能使血清更【gèng】大程【chéng】度的析出。)4℃ 1000×g离心【xīn】20分钟，仔细收【shōu】集上清【qīng】。建议【yì】将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻【dòng】融。
 

　　采【cǎi】血过【guò】程中应【yīng】避免溶血，因为【wéi】红细胞裂解时【shí】会释放具有【yǒu】过氧化酶活性的物质，在【zài】以HRP为标【biāo】记的【de】ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测【cè】的不准确性。同【tóng】时也应避免【miǎn】细【xì】菌污染，因为菌体内【nèi】可能含有内源性【xìng】的HRP从而导【dǎo】致检【jiǎn】测的假阳性。
 

　　2、 血浆
 

　　用含【hán】抗凝剂的采血管【guǎn】或离心管采集血液【yè】标本，标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min，取上【shàng】清即血【xuè】浆。将【jiāng】上清【qīng】分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避【bì】免使用溶血或高【gāo】血脂的标本【běn】。
 

　　常用的抗凝【níng】剂为EDTA、肝素钠和枸橼【yuán】酸钠等，检测时还【hái】应【yīng】仔细阅读【dú】试剂盒说明书，检查试【shì】剂盒【hé】是否对【duì】抗凝剂有特殊要求。
 

        3、 细胞培【péi】养上清【qīng】

 

　　取细胞培养上【shàng】清到离心管，1000×g离心【xīn】20min，除【chú】去【qù】细胞碎片及杂质，取【qǔ】上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融【róng】。
 

　　4、 细胞裂解液
 

　　吸去培养板内【nèi】的培养基，用胰酶消化细胞【bāo】，加适量培【péi】养【yǎng】基将细胞【bāo】从培养板上吹下【xià】来【lái】。悬浮细胞可省略【luè】。
 

　　收集细【xì】胞悬液，1000×g离心10min，弃【qì】去培养基，用预冷的PBS润【rùn】洗3次。
 

　　加【jiā】入适量的预冷PBS或细【xì】胞裂解液(临用【yòng】前【qián】加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常【cháng】6孔板一个【gè】孔的细胞【bāo】量需要150~250μL PBS重【chóng】悬。
 

　　将【jiāng】样品放【fàng】入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融【róng】几次，使细胞充分裂解【jiě】。也【yě】可将样品【pǐn】进行超【chāo】声【shēng】破碎，以达到裂解【jiě】的目的【de】。
 

　　4℃ 10000×g 离心10min，除去【qù】细胞碎片，取上【shàng】清【qīng】，-20℃或-80℃保存【cún】，避免【miǎn】反复冻【dòng】融。
 

　　5、组织匀浆液
 

　　将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗【xǐ】，洗去组织表面残【cán】留的血液【yè】或【huò】杂质。
 

　　将组织块称重，记录后剪碎【suì】，碎块【kuài】应尽量小，便于【yú】匀【yún】浆【jiāng】得更充分。
 

　　将【jiāng】组织按一【yī】定的比例【lì】加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂【jì】)匀【yún】浆，匀浆【jiāng】时置【zhì】于冰上或冰【bīng】浴中。(通常按组织【zhī】重量：PBS体积=1:9的比例【lì】匀浆，例如1g的组织样本【běn】对应9mL的【de】PBS，具体体积可【kě】根据【jù】实验需要适当调整，检测【cè】后计算样品浓度时应乘【chéng】以相应的【de】稀释倍【bèi】数)
 

　　吸取【qǔ】匀浆液到离心管，4℃ 5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避【bì】免反复冻融。
 

　　6、 尿液、唾液等其他液体生物样本
 

　　1000×g离心20min，取上清即可检测。
 

　　总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋【dàn】白的含量，所以【yǐ】应保【bǎo】证所【suǒ】有样本均【jun1】为澄清的【de】液体【tǐ】，沉淀【diàn】或悬浮物都应离心去除。
 

　　为【wéi】了保证检测的准确性，保【bǎo】存于-20℃或-80℃的样本在【zài】1~6个月内检测；4℃保存的样本【běn】应在1周【zhōu】内进行【háng】检测。另外，还应保【bǎo】证样本不含【hán】NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而【ér】导致假阴【yīn】性【xìng】的【de】结果。