一直以来ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特【tè】异性较好的特点【diǎn】在临床上得【dé】到了广泛的应用，但操【cāo】作【zuò】中【zhōng】的各个环节【jiē】对试【shì】验的检测【cè】效【xiào】果影【yǐng】响较大，如不注意，有可能导致显色不全【quán】、花板等结【jié】果。上【shàng】海【hǎi】酶联生物现将【jiāng】操作中各个环节常出现问题【tí】的原因及【jí】解决办【bàn】法总结于下，以期给各位同行带来【lái】一些启发，提高试验质【zhì】量。
 

　　下【xià】面分析Elisa试验操作中可能影响【xiǎng】结【jié】果的原因，并【bìng】给【gěi】出相应的解决【jué】办法。
 

　　一、选择试剂
 

　　选【xuǎn】择质量优良的检测试剂，严格按照【zhào】试剂说明书进行操作，操【cāo】作前【qián】将试剂【jì】在【zài】室温下平衡【héng】9-22分钟。
 

　　二、加样
 

　　1、血清或血浆标本分离不好即进行加样；
 

　　2、手工操【cāo】作中，加样板过多造成加样后放入【rù】孵箱前等【děng】待【dài】时间过长(特别是室内【nèi】温度【dù】较高【gāo】时)；
 

　　3、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
 

　　解决办法：
 

　　1、标本为血清：将血液先自然存放9-22小时后【hòu】，再【zài】用3000rmp离【lí】心【xīn】15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的【de】血液标本收集【jí】管，采血【xuè】后必【bì】须立即颠倒采血管混合9-22次，放置一段时间后【hòu】，3000rpm离心【xīn】15分钟【zhōng】;若在【zài】几天内检【jiǎn】测，可放在9-22℃冰箱中，若【ruò】要贮存，则置于【yú】-20℃的低温冰箱内【nèi】。
 

　　2、加样后及时放入孵箱。
 

　　3、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
 

　　4、如果采【cǎi】用AT或其他全自动加样，选【xuǎn】择FAME或其他后处理仪器加酶【méi】试【shì】剂。
 

　　5、标本较多时，请分批操作。
 

　　三、孵育
 

　　1、孵育时未贴封片或加盖，使标本或【huò】稀释液蒸发【fā】，吸附于孔【kǒng】壁，难【nán】于【yú】清洗*;
 

　　2、孵育时【shí】间【jiān】人为延长，导致非特【tè】异性结合【hé】紧附于反应孔【kǒng】周围，难以【yǐ】清洗*。
 

　　解决办法：
 

　　1、贴封片或加盖；
 

　　2、按说明步骤严格控制操作时间。
 

       四、洗板

 

　　1、采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。
 

　　2、采【cǎi】用半自动洗板机【jī】洗【xǐ】板时，洗【xǐ】液量不足，导致洗板不*；洗板【bǎn】针堵塞，抽吸不*;洗板不畅，导致洗板效果【guǒ】差。
 

　　3、反应板过多造成洗板等待时间长。
 

　　解决办法：
 

　　1、保证洗液注满各孔，洗板针畅【chàng】通【tōng】，洗【xǐ】完板【bǎn】后在吸水纸【zhǐ】(选择干净、无或少尘的【de】吸水材料)上轻【qīng】轻【qīng】拍干；
 

　　2、合理安排，或多用几台洗板机。
 

　　五、显色
 

　　1、显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；
 

　　2、加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
 

　　解决办法：1、显色【sè】剂尽【jìn】量在临用前【qián】配制，坚【jiān】持不【bú】用过期显色剂，肉【ròu】眼可见【jiàn】浅蓝色的TMB显色【sè】剂不用；
 

　　2、加样时保持显色剂不外流；
 

　　3、A、B液应避免接触金属器械。
 

　　六、终止
 

　　可能原因如加【jiā】终止液时产生较【jiào】多气【qì】泡，导致假阳性增【zēng】加。所以在加终止液时应【yīng】避免产生【shēng】气泡。
 

　　七、读板
 

　　如读【dú】板时板底【dǐ】不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证【zhèng】酶标板不接触【chù】次氯酸；尽可【kě】能【néng】实现ELISA检测标准【zhǔn】自动【dòng】化，有效【xiào】提高检测质【zhì】量。
 

　　在实际操作中，除了选择优【yōu】良试剂外，必须【xū】严格按照操作步骤进行操作【zuò】，同时作【zuò】好【hǎo】室内质控、室间质评【píng】，以严谨的工作作风【fēng】检测每一份标本【běn】，才能保证【zhèng】检测质量。上海酶联【lián】生物拥有全自【zì】动酶【méi】标【biāo】仪，这对于实现ELISA试剂盒标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。