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研域详解:细胞凋亡的形状学检测办法说明
更新【xīn】时【shí】间:2024-9-23   点击次数:1000次

1 · 光学显微镜和倒置显微镜

(1) 未染色细胞:凋亡细【xì】胞【bāo】的【de】体积变小、变形,细胞膜无缺【quē】但呈现【xiàn】发【fā】泡现象,细胞【bāo】凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞呈现舒展、变圆、坠【zhuì】落。
 
(2) 染色细胞:常用姬姆【mǔ】萨【sà】染色【sè】、瑞【ruì】氏染色【sè】等。凋亡细胞的染【rǎn】色质浓缩、边缘化,核【hé】膜裂解、染色【sè】质切割成块状和凋亡小【xiǎo】体等典型【xíng】的凋亡形状【zhuàng】。
 
2 · 荧光显微镜和共集合激光扫描显微镜
 
一般以细胞【bāo】核染色【sè】质的形状学改动为目标来评判【pàn】细胞【bāo】凋亡【wáng】的发展情况【kuàng】。
 
Hoechst是【shì】与DNA特异结合的活性染料,贮存【cún】液用蒸【zhēng】馏水配成1mg/ml的浓度,运用时用【yòng】PBS稀释成【chéng】终浓度为【wéi】2~5mg/ml。
 
DAPI为半通透性,用于【yú】惯例【lì】固定细胞的染色【sè】。贮存液【yè】用蒸馏水配成1mg/ml的【de】浓度,运用【yòng】终【zhōng】浓度一般为0.5 ~1mg/ml。
 
效果评判:细胞凋亡【wáng】过程中细胞核【hé】染【rǎn】色质的形【xíng】状【zhuàng】学【xué】改动分为【wéi】三期:Ⅰ期的细胞【bāo】核呈【chéng】波纹状【zhuàng】(rippled)或呈折缝样(creased),部【bù】分染色质【zhì】呈现浓【nóng】缩情况;Ⅱa期细胞核的染色【sè】质高度凝集、边缘化;Ⅱb期的细【xì】胞核裂解为碎块,发作凋亡小【xiǎo】体)。

3 · 透射电子显微镜观察
 
细胞效果评判:凋【diāo】亡细胞体积【jī】变小,细胞质浓缩【suō】。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细【xì】胞【bāo】核【hé】内【nèi】染【rǎn】色质高度环绕,呈现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝集、边缘【yuán】化;细胞【bāo】凋亡的晚期,细胞核裂【liè】解为碎块【kuài】,发作凋亡【wáng】小【xiǎo】体。

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