我们知道，在【zài】细胞培养检测实验在实验仪【yí】器、培养基等等【děng】工作【zuò】上都【dōu】要耗【hào】费不少的【de】人力和【hé】体力。好在很久以【yǐ】前就有高人发【fā】明了细胞保存这个实【shí】验步骤【zhòu】，将暂【zàn】时多出来的细胞冰【bīng】冻【dòng】保存，以【yǐ】zui大程度保存细胞活力。

(1)冻存细胞传统方法: 

冷存【cún】管【guǎn】置于4℃10分【fèn】钟【zhōng】--->-20℃30分【fèn】钟--->-80℃16～18小时(或【huò】隔夜)--->液【yè】氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止【zhǐ】胞内【nèi】冰晶过大，造【zào】成【chéng】细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接【jiē】放入-80℃冰【bīng】箱中，惟存【cún】活率稍微降低一些。

(2)程序降温：
利用已设定【dìng】程序【xù】的等速降温机以-1～-3℃/分【fèn】钟之速度【dù】由室温降【jiàng】至(-80℃以下)-120℃，再放在液【yè】氮槽vaporphase长期【qī】储存。适用【yòng】于悬浮型【xíng】细胞与hybridoma之保存。

冻存细胞步骤：

(1)冷冻前9-23小时更换半量或全【quán】量【liàng】培养基【jī】，使细【xì】胞【bāo】处于指数生长期。

(2)配【pèi】制冷冻保存溶液(使用前配【pèi】制)：另取一【yī】离心【xīn】管，加【jiā】入培养【yǎng】基、血【xuè】清，逐滴加【jiā】入二甲基亚砜(DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室【shì】温下待【dài】用。

(3)离心【xīn】收集【jí】培养之细胞，用加血【xuè】清的培养【yǎng】基【jī】重【chóng】悬起细胞，取少量细胞悬浮液【yè】(约0.1ml)计数细胞浓度【dù】及冻前存活【huó】率。

(4)取与细胞悬液【yè】等【děng】量的冻存液，缓慢逐滴【dī】加【jiā】入细胞悬液，并晃动试【shì】管【guǎn】，制成细胞冻存悬【xuán】液(DMSOzui后浓度为5～10%)，使细【xì】胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分【fèn】装于已标示*之【zhī】冷冻【dòng】保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作【zuò】污【wū】染检【jiǎn】测【cè】。严密封口后，注明细胞名【míng】称、代【dài】数、日期。然后进行冻存。