ELISA的基础是抗【kàng】原【yuán】或抗体的固相化及抗【kàng】原或抗体的酶【méi】标记。结合在固相载【zǎi】体表【biǎo】面的抗原或抗体仍保持其【qí】免疫学【xué】活性，酶标记的抗【kàng】原或抗体既保【bǎo】留其【qí】免疫【yì】学活性【xìng】，又保留酶的活性。

这种测定方法中有三个必要的试剂：

（1）固相【xiàng】的抗原或抗【kàng】体，即"免疫吸附【fù】剂"（immunosorbent）

（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）

（3）酶【méi】反应的底物【wù】。根据试剂的来源【yuán】和标【biāo】本的情况以及检测的具体条件【jiàn】，可【kě】设计出【chū】各种【zhǒng】不同类型的【de】检测方法

双抗体夹心法是检测抗原常用的方法。

操作步骤如下：

1） 将【jiāng】特【tè】异性抗体【tǐ】与固相载体【tǐ】联结，形成固相抗【kàng】体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

2） 加【jiā】受检标本，保【bǎo】温反【fǎn】应。标本【běn】中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原【yuán】抗体【tǐ】复合物。洗涤除【chú】去其他未结合物质。

3） 加酶标抗【kàng】体，保温反应。固相【xiàng】免疫复合【hé】物【wù】上的抗原与酶标抗体【tǐ】结【jié】合。*洗涤【dí】未结合【hé】的酶标抗体。此时固相载体上带有的【de】酶量与标本中受【shòu】检抗原【yuán】的【de】量【liàng】相关。

4） 加【jiā】底物显色。固相上的酶催化【huà】底物成为【wéi】有色产物【wù】。通过比色【sè】，测知标本中抗原的量。

双抗体夹【jiá】心法适用【yòng】于【yú】测【cè】定二价或二【èr】价以上【shàng】的大分【fèn】子抗原，但不适用于测定【dìng】半【bàn】抗原及小分子【zǐ】单价抗原，因其不能形成两【liǎng】位点夹心。

【双抗夹心法测抗体】

反【fǎn】应【yīng】模式【shì】与双抗体夹心法【fǎ】类似【sì】。用特【tè】异性抗原进行包被和制备酶结【jié】合物，以检【jiǎn】测相应的【de】抗体。与间接法测抗体【tǐ】的不同之处为以酶标抗原【yuán】代替酶标抗抗体。此【cǐ】法中【zhōng】受检【jiǎn】标【biāo】本不需【xū】稀释【shì】，可直接用于测定【dìng】，因此【cǐ】其敏【mǐn】感度相对【duì】高于间接法。乙肝标志【zhì】物中抗HBs的检测常采用本法。本【běn】法关键在于酶标抗【kàng】原的制备，应根据抗【kàng】原结构的不同，寻找合【hé】适的标【biāo】记方【fāng】法。

【直接法测抗体】

间接法是检测【cè】抗【kàng】体常用的方法。其原理【lǐ】为利【lì】用酶标记【jì】的抗抗体（抗人免【miǎn】疫【yì】球蛋白抗体【tǐ】）以检测与【yǔ】固相抗原结合的受检抗体，故【gù】称为间接【jiē】法。

操作步骤如下：

1）将特异性抗原与固相载体联结，形【xíng】成固相抗【kàng】原【yuán】。洗【xǐ】涤除【chú】去未结合的【de】抗【kàng】原及杂质。

2）加【jiā】稀释的受检血清，保温【wēn】反应。血清中【zhōng】的特异抗体与【yǔ】固相抗原结【jié】合，形成固相【xiàng】抗原抗体【tǐ】复合物。经【jīng】洗涤后，固【gù】相【xiàng】载【zǎi】体上只留下特异性抗【kàng】体，血【xuè】清中的其他成份在洗涤过程中【zhōng】被洗去。

3）加酶标抗抗体。可用酶【méi】标【biāo】抗人Ig以检测总抗体【tǐ】，但一般多用酶标抗【kàng】人IgG检测IgG抗体。固相免【miǎn】疫复合【hé】物中【zhōng】的抗体与酶标【biāo】抗体【tǐ】抗体结合，从而间接【jiē】地标记上酶。洗涤后，固相【xiàng】载体上的【de】酶量【liàng】与【yǔ】标本中受检抗体的量正相【xiàng】关。

4）加底物显色

本【běn】法主要用于对【duì】病原体抗体的【de】检【jiǎn】测而进行【háng】传染病【bìng】的诊断【duàn】。间接法【fǎ】的【de】优点是只要变换包被抗原就可利用同【tóng】一酶【méi】标抗抗体建立检测相应抗体【tǐ】的方法。