进【jìn】口ELISA试剂盒基础是抗【kàng】原或【huò】抗体的固相化及抗原【yuán】或【huò】抗体【tǐ】的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保【bǎo】持其免疫【yì】学【xué】活【huó】性，酶标记的抗原或抗体既【jì】保留其免【miǎn】疫学活【huó】性【xìng】，又保留酶的活性。在测【cè】定时，受检标本（测【cè】定其中的抗体或抗原）与固相载体表【biǎo】面【miàn】的抗原或抗体起【qǐ】反应。用洗涤的方【fāng】法使固【gù】相载体上形成的抗原【yuán】抗体复合物与液体中的其他【tā】物质分【fèn】开。再加入酶标记的抗原或【huò】抗体，也通【tōng】过【guò】反【fǎn】应而结合在固相载体上。此【cǐ】时固相上的酶量与标本中受【shòu】检物质【zhì】的量呈一定的比例。加入酶反应的底【dǐ】物后，底物被酶【méi】催【cuī】化成为有色产【chǎn】物，产【chǎn】物的量【liàng】与标【biāo】本【běn】中【zhōng】受检物质的量【liàng】直接相关，故可根【gēn】据呈色的深浅【qiǎn】进行定性【xìng】或定【dìng】量分【fèn】析【xī】。由于酶的催化效率很高，间接地放大【dà】了免疫反【fǎn】应的结果，使测定方法达到很高的敏感度【dù】。

进口ELISA试剂盒操作步骤:

1．从已平衡至室温【wēn】的密封袋中取出试验所需板【bǎn】条，未用的板条【tiáo】和干燥剂请放回铝箔袋内压 实【shí】自【zì】封条，密【mì】封口袋【dài】，放回4℃。

2．空白孔加标准品【pǐn】和标本稀【xī】释【shì】液，其余【yú】相应孔中【zhōng】加标本或不同浓度标准【zhǔn】品(100ul/孔)，用封【fēng】板胶纸【zhǐ】封住反应孔，36℃孵箱孵育【yù】90分【fèn】钟。

3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

4．洗板5次。

5．空白孔【kǒng】加生物【wù】素【sù】化抗体【tǐ】稀释液【yè】，其余孔加入生物素化【huà】抗体工作液【yè】(100ul/孔【kǒng】)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱【xiāng】孵育60分钟。

6．提前20分【fèn】钟准备酶结合物工作液【yè】。避光室温(9-24 ) ℃ 放置。

7．洗板5次。

8．空【kōng】白孔加酶结合物稀释液，其【qí】余孔【kǒng】加入【rù】酶结合物工作【zuò】液(100ul/孔)。用新封板胶【jiāo】纸封【fēng】住反应【yīng】孔【kǒng】，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

10．洗板5次。

11．加入显色【sè】底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵【fū】育【yù】15分钟。

12．加【jiā】入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量【liàng】OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结【jié】果并打印一份【fèn】纸【zhǐ】质结果。

13．进【jìn】口ELISA试【shì】剂盒实验完毕后将【jiāng】未用完的试剂按规定的【de】保存温度放回【huí】电冰【bīng】箱保存至有效期【qī】结束。 建议保存酶【méi】标板框【kuàng】，以备下次或者今后【hòu】试验使用【yòng】。