大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M
细胞介绍：
该细胞系来自能【néng】移植的雄【xióng】性大鼠肾上腺嗜【shì】铬细胞瘤。这【zhè】些细胞表达神经【jīng】生【shēng】长因子(NGF)受体。NGF可诱导产生神【shén】经【jīng】表型。细胞不【bú】合成肾【shèn】上腺素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 F12K 培养基(F12K: SIGMA，添加 NaHC03 2.5g八)，80%;热【rè】灭活马血清，15%;胎牛【niú】血清，5%，添【tiān】加1%PS。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度。
3. 冻存【cún】液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。

2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液【yè】加入【rù】培养瓶【píng】中培养过【guò】夜【yè】（或将细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜）。第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置【zhì】于【yú】37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下【xià】观察细胞消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后【hòu】加少量培养基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的【de】含【hán】8ml培养基【jī】的新皿【mǐn】中【zhōng】或者瓶中。
细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时【shí】，弃去培养基后加入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱【tuō】落后【hòu】，加入约lml含血清【qīng】的培养基后加入冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存【cún】。
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及细【xì】胞有【yǒu】污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的生物危害【hài】性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护【hù】，所【suǒ】有废液及接【jiē】触【chù】过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤
2)形态：多角形
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M运输和保存【cún】：使用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。收到细【xì】胞【bāo】后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上【shàng】清，加入推荐使用的培【péi】养基后转移至【zhì】l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。