酶联生【shēng】物免疫学检验的【de】各领域中的【de】ELISA试剂盒，有着灵敏度高、特异【yì】性强【qiáng】、经济性较【jiào】好【hǎo】等优点【diǎn】，酶联生物的ELISA试剂盒在所有产品中销【xiāo】量是高的【de】，本公司ELISA试剂盒仅用于科研，不用于临【lín】床。在实验【yàn】过【guò】程中肯定会有很【hěn】多科研朋【péng】友是【shì】不懂的，今天就给大家介绍【shào】一下ELISA试剂盒的使【shǐ】用方法【fǎ】。

一：实验操作程序简述

1. 准备试剂，样品和标准品；

2. 加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟；

3. 洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟；

4. 加入终止液；

5. 15分钟之内度OD值；

二：包被的条件

包【bāo】被用抗【kàng】原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被【bèi】液【yè】的【de】pH等应根据试【shì】验的特点和材料的性质而选【xuǎn】定【dìng】。ELISA试【shì】剂【jì】盒【hé】抗体和蛋【dàn】白质抗原一【yī】般【bān】采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也【yě】有【yǒu】用pH7.2的磷酸盐缓【huǎn】冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。

通常在ELISA板孔【kǒng】中加入包被液后，在9-21℃冰箱【xiāng】中【zhōng】放置放置一个【gè】晚上，37℃中保温2小时【shí】被【bèi】认为具有同等的包被效果。包【bāo】被的适当【dāng】浓【nóng】度随载体和包被物【wù】的性质可有很大【dà】的变化，每批材料需通过【guò】实验与【yǔ】酶【méi】结合物的浓度协调选【xuǎn】定。一般蛋【dàn】白【bái】质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。

三：竞争法测抗原

小【xiǎo】分【fèn】子抗【kàng】原或半【bàn】抗原因缺乏可【kě】作夹【jiá】心法的两【liǎng】个以【yǐ】上的位点，因【yīn】此不能用双抗体夹心法进行测【cè】定【dìng】，可以采用【yòng】竞争法模【mó】式。其原理是标本中的【de】抗原和一定量的【de】酶标抗原竞【jìng】争与固相【xiàng】抗体结合【hé】。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少【shǎo】，zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

四：抗原和抗体

制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶【méi】联结时【shí】其他杂【zá】蛋白的干【gàn】扰。用亲和层析纯的抗体【tǐ】，这【zhè】样全部酶【méi】结合物均【jun1】具有特异的免【miǎn】疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验【yàn】结【jié】果本底【dǐ】浅淡【dàn】。如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰。

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