在ELISA试剂盒中一般有两次抗【kàng】原抗体反【fǎn】响，即加标本和加酶【méi】结合物后，抗原抗体反响的完结需求有一定的【de】温度【dù】和时刻【kè】，这一保温进【jìn】程称为【wéi】温育【yù】，有人【rén】称【chēng】之【zhī】为孵育，在ELISA试剂【jì】盒中似不【bú】恰当。

1. 为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育？

ELISA属固【gù】相免疫测定，抗【kàng】原、抗【kàng】体的【de】结合只在【zài】固【gù】相表面上发生，以抗【kàng】体包被的夹心法为例，加入【rù】板【bǎn】孔中的标本，其间【jiān】的抗原并【bìng】不是都【dōu】有平等的和固相抗结合的时机，只有【yǒu】贴近孔壁的一层溶液中的【de】抗原直接与抗体接触，这是一【yī】个【gè】逐步平衡的进程【chéng】，因而需【xū】经【jīng】扩散才能到达反响【xiǎng】的结尾。在这以后加【jiā】入【rù】的酶【méi】标记抗体与固相【xiàng】抗原的【de】结合也同样如此。

2. 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。

37℃是实验室【shì】中常用的保温温度，也是大多【duō】数抗原抗体结合的适【shì】宜温度，在建立ELISA方法作反响动力学研究时，实验表明【míng】，两次抗【kàng】原抗体反响【xiǎng】一般在【zài】37℃经1～2小时，产品的可达【dá】高【gāo】峰。为加快反响，可【kě】进【jìn】步【bù】反响的温度，有些实【shí】验在43℃进【jìn】行，但【dàn】不宜选用更高【gāo】的温度。抗原抗体反响4℃更为，在【zài】放射免疫测定中多使【shǐ】反【fǎn】响在冰箱中过【guò】夜，以构成多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒【hé】中一【yī】般【bān】不予选【xuǎn】用【yòng】。

ELISA试剂盒保【bǎo】温的方式除【chú】有的【de】ELISA仪器附有特制的【de】电【diàn】热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂【jì】盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴【tiē】着水面，使温度敏捷平衡【héng】。为防止蒸腾【téng】，板【bǎn】上应加盖，也可【kě】用塑料贴【tiē】封纸【zhǐ】或保【bǎo】鲜膜覆盖【gài】板孔，此时可让反响板漂【piāo】浮在水【shuǐ】面上。若用保温【wēn】箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的资【zī】料如金属等，在盒底垫湿【shī】的纱布，后【hòu】将ELISA板放在【zài】湿纱布【bù】上。湿盒应先放【fàng】在保温箱【xiāng】中预温至规【guī】则【zé】的温【wēn】度，特别是在气温【wēn】较低的时候更应如此【cǐ】。

无论是水浴【yù】仍是湿【shī】盒温育，反【fǎn】响板均不宜叠放，以确保各【gè】板的温度【dù】都能敏【mǐn】捷【jié】平衡【héng】。室温【wēn】温育的反响，操作【zuò】时的室温应严厉限制在规则的【de】范【fàn】围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要【yào】求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只需平置【zhì】于操作台上即可。应留意温【wēn】育的【de】温度和【hé】时刻应【yīng】按规【guī】则力【lì】求【qiú】准确。为【wéi】确保这【zhè】一点，一个人【rén】操作时，一次不宜多于两块板一【yī】起测定。