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减少ELISA实验误差需注意的地方
更新时间:2024-9-22   点击【jī】次数【shù】:598次

做任何实验,我们能做的就是尽zui大的努力减少实验误差,在ELISA试剂盒实验操作中【zhōng】,误差分有系统【tǒng】误差、偶然【rán】误【wù】差【chà】、过失误差,而一个小小的误【wù】差【chà】主意能【néng】够影响【xiǎng】到实【shí】验,那么怎样【yàng】才能缩【suō】小实验误差呢?除了需要细心之外,还有一【yī】些需要重点【diǎn】


ELISA试剂盒注意的地方

① 检验技师应具备从事【shì】实验室【shì】操作的基【jī】本素质和实践经【jīng】验【yàn】。能熟【shú】练操【cāo】作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问【wèn】题的能力,对实验中出【chū】现的意【yì】外情况能及时妥【tuǒ】善解【jiě】决。

② 使用校【xiào】对过的微【wēi】量移液器,排除自然【rán】误差。移【yí】液器准确与否对定【dìng】量检【jiǎn】测尤为重要。

③ 仔细【xì】阅读说明【míng】书,严【yán】格【gé】按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试【shì】剂【jì】不可混用。值得改进的地方,反复试【shì】验确【què】定成立后才能改进。

④ 洗涤cedi,如若洗板不cedi,酶结合物【wù】本【běn】底显【xiǎn】色会呈【chéng】现假阳性【xìng】。洗涤液【yè】要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出【chū】现本【běn】底增【zēng】高现象,也可能出现假阳性。

⑤ 严控反应时间,反应【yīng】时间过长,酶失活【huó】;反应时间【jiān】过短,酶结合物【wù】不【bú】能与血清【qīng】中的微【wēi】生物【wù】抗原抗体充分结合,物结构松散不牢固,容【róng】易【yì】洗【xǐ】掉,都可【kě】能造成假【jiǎ】阴性。

⑥ 注意试剂盒保存期,过保存期的试剂不能使用。

⑦ 评估试【shì】剂的实用性,试剂的稳定与【yǔ】否,对准确率的高低到头重要。在试剂启用【yòng】前,应进行【háng】阴、阳对照及样品反复【fù】比照【zhào】试验,判【pàn】定试剂【jì】符合【hé】要【yào】求后方可使用【yòng】。

⑧ 严格掌握显色时间,显色时间过【guò】短,加入终止液反应【yīng】终止后,底物结合【hé】物的量过少,易出【chū】现假【jiǎ】阴性。超过显色要【yào】求时【shí】间【jiān】后显【xiǎn】色,应【yīng】判为假阳性,这【zhè】可能与试剂本身【shēn】有关。加显【xiǎn】色剂后立即【jí】显色,不可报阳性,这【zhè】可能【néng】是本底显色的结果。

⑨ 加样要准确【què】、快【kuài】速【sù】。如果加样不【bú】准【zhǔn】确,酶物【wù】的量不能确【què】定,直接影响【xiǎng】显色结果。显色的深浅【qiǎn】及A值的测定【dìng】与加入显色剂和终止液的量有关【guān】,所以加样应慎重。要求在一定时间内加【jiā】样完毕的【de】实【shí】验,如果加样迟缓,便出现误差,而且【qiě】试剂长时【shí】间暴【bào】露在外,尤其【qí】室温【wēn】过【guò】高时,保存【cún】期会缩短甚至失效。

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