1、包被用抗原【yuán】或抗体【tǐ】的【de】浓度，包被【bèi】的温度【dù】和时间，包被液的pH等应根据【jù】试验的特点和【hé】材料的性质而选定。抗体和蛋白【bái】质抗原【yuán】一般采用pH9.6的碳酸盐【yán】缓冲【chōng】液作为稀释液，也有用pH7.2的【de】磷酸盐缓冲液【yè】及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作【zuò】为稀释液的。通常【cháng】在ELISA试剂盒【hé】板孔中加入包被液后，在9-22℃冰箱中放置过夜，37℃中保【bǎo】温2小时【shí】被认为【wéi】具有【yǒu】同等的【de】包被【bèi】效果。包被的适当浓【nóng】度随载体和包【bāo】被物【wù】的性质可【kě】有很【hěn】大的变化，每批材【cái】料需通过实验与酶结【jié】合物的【de】浓度协【xié】调选定。一般【bān】蛋白【bái】质的【de】包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。

2、封闭是否必要，取决于ELISA试剂盒的模式【shì】及【jí】具体的实验条件。并非所有的【de】ELISA固相均【jun1】需封闭，封【fēng】闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来【lái】，双【shuāng】抗体夹心法【fǎ】，只要【yào】酶标记物【wù】是高活性【xìng】的，操作时【shí】洗，不经封【fēng】闭也可得到满意的结果。特别是用单抗【kàng】腹水直接包被时，因其中【zhōng】大量非抗体【tǐ】蛋白在包被时【shí】同样也吸附在固【gù】相表面，业已起【qǐ】到【dào】了类似【sì】封【fēng】闭剂【jì】的作用【yòng】。但在间【jiān】接法测定中【zhōng】，封闭一般是不可少的。包被好的ELISA板干燥后放【fàng】入密封袋或锡【xī】袋中，在【zài】低温可保存【cún】数月【yuè】。

3、封闭（blocking）是继包被之后用高【gāo】浓度的无【wú】关【guān】蛋白质溶【róng】液再包被【bèi】的过程。抗【kàng】原或抗体包被时所用的浓度较【jiào】低，吸收后固相【xiàng】载体表面【miàn】尚有未【wèi】被【bèi】占据的空隙，封闭就是让【ràng】大【dà】量不相【xiàng】关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA试【shì】剂盒其【qí】后的【de】步【bù】骤中干扰物质的【de】再吸附。封【fēng】闭的手续与包被相类似。常用的封闭剂是【shì】0.05%-0.5%的【de】牛【niú】血清白蛋白，也有用10%的小【xiǎo】牛血清【qīng】或1%明【míng】胶作为【wéi】封闭剂的。脱【tuō】脂奶粉也是【shì】一种良【liáng】好的封闭剂，其zui大的特点是价廉，可以高浓度使用【yòng】（5%）。高质量的速溶食用低【dī】脂奶【nǎi】粉即可直接当作封闭剂使用【yòng】，但由于奶粉的成【chéng】份复杂，而且封闭后的载体不易【yì】长期保存【cún】，因此在【zài】试【shì】剂【jì】盒的【de】制备中较【jiào】少【shǎo】应用。

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以上浅谈ELISA试剂盒的包被与封闭条件，您知道了吗？