1.剖析实验使用的类型 

一般抗【kàng】体阐明书都列【liè】出该抗体经实验验证过适【shì】用于【yú】何【hé】种剖析类型【xíng】，假如抗体【tǐ】阐明书没【méi】有提及的使用类型，并不【bú】意味【wèi】着该抗【kàng】体不适用于【yú】此种剖析使用类型【xíng】，而仅是阐明尚未经过此种剖析实验【yàn】验【yàn】证，假如抗【kàng】体不适用某【mǒu】些【xiē】剖析【xī】实验，则会在抗体阐明书上标注出来不【bú】适于某【mǒu】剖析实验。

2.样本的物种

应挑【tiāo】选物种相同或有穿插反【fǎn】响的抗体，抗体可能【néng】与不同【tóng】物种【zhǒng】的【de】同种【zhǒng】靶蛋白有穿插反响，因【yīn】其氨基酸序列同源性较高【gāo】，假【jiǎ】如样本的种类【lèi】未列入抗体阐明书上的穿插【chā】反响种属表中，并不【bú】意味着该抗体不适用于检【jiǎn】测该物种【zhǒng】的蛋白【bái】，而仅仅表明该物种尚未【wèi】用此抗体检【jiǎn】测验【yàn】证过，应经过序列比【bǐ】对【duì】的办法来猜【cāi】测穿插反响，可使用Expasy 和 NCBI BLAST来进【jìn】行不【bú】同【tóng】物种蛋白【bái】同【tóng】源性比对。

3.样本蛋白的结构性质 

了解样【yàng】本蛋白的结构性质【zhì】有【yǒu】助于挑【tiāo】选*适【shì】宜的抗体，至少两方面因素需求考【kǎo】虑:

1）.待测样本【běn】蛋白的结构域【yù】：抗体是由【yóu】各种【zhǒng】不同【tóng】免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免【miǎn】疫原包含【hán】：全长蛋白、蛋【dàn】白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞【bāo】，抗体阐【chǎn】明书一般都有免疫原的【de】描【miáo】绘，假如打算检测【cè】的是蛋【dàn】白片断或一种特殊的同【tóng】型【xíng】物或【huò】蛋白全长的某一区【qū】域【yù】，则【zé】必须挑选用含此片段【duàn】域的免疫【yì】原制备【bèi】出【chū】的抗体。

2）.样本的提取或处理进【jìn】程：某些【xiē】抗【kàng】体要求样【yàng】本【běn】经过某些特【tè】殊处理，例如：许多【duō】抗体【tǐ】只识别还原【yuán】和变性的【de】、表位已暴【bào】露不【bú】受【shòu】二级四级结构阻碍【ài】的蛋白样本，另一方【fāng】面【miàn】，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

4.一抗宿主物种的挑选 

一【yī】般说【shuō】来，在使用偶联【lián】二抗结合无偶【ǒu】联物的【de】一抗时，一抗宿主动物的物种挑选较为重要，关于免疫组化而言，尽可能【néng】挑选【xuǎn】与【yǔ】样本【běn】不同种系物种【zhǒng】的一抗，从而避免二【èr】抗【kàng】与【yǔ】样本内【nèi】源性免疫球【qiú】蛋白发【fā】生穿插【chā】反响

5.二抗的挑选

二抗应选用【yòng】与使用的一【yī】抗相同的物【wù】种来历【lì】，主张检查二抗阐明书保证该抗体适用【yòng】于【yú】你的检测使用， 二抗【kàng】一般连接荧【yíng】光素FITC或发光团。

6.两层染色抗体的挑选

用未偶联一抗进行【háng】细胞培【péi】养物或安【ān】排切片的两层免疫染【rǎn】色要求一抗【kàng】来历于不【bú】同【tóng】物种而且【qiě】二抗别离【lí】识别其中，二抗阐明书【shū】应【yīng】描【miáo】绘其与【yǔ】其它物种来历的免疫球蛋有否有穿插吸附【fù】。

7.荧光和化学发光符号 

连接【jiē】于二抗的符号【hào】物是为了检测抗体的【de】结【jié】合，挑选符号物依赖【lài】于几【jǐ】个参数：